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【求助/交流】TA克隆已有2人参与
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| 我用的载体是PGM-T，3000多bp，连的也是3000多bp的一段基因，是胶回收的，没有其他片段。可是挑白色菌落提出的质粒单酶切电泳只有4000多bp。请教高人，是怎么回事啊？ |
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zjzz
木虫 (正式写手)
在通往变态的坦途上
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reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-09-30 07:19:07
lij2(金币+1): 2010-11-08 13:06:05
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-09-30 07:19:07
lij2(金币+1): 2010-11-08 13:06:05
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我一般做菌落PCR，转化培养过夜。 第二天拿一个相同抗性的平板，下面垫格子纸计数。用10ul枪头挑一个克隆，先在新平板上一个小格子内划线，然后把枪头放到装有50ul水的200ul tupe里，将此tupe到PCR仪上98°处理10分钟，然后拿出吸取1ul做模板 一般做菌落或菌液pcr不怕模板少，就是模板太多引入杂质过多导致假阴性 ， 有时候菌落小划完线枪头上看起来什么东西都没有，不过不影响，其实有菌在。 注意做正负对照 把新平板去培养，有阳性条带的就把平板上的菌摇起来抽质粒 |
14楼2010-09-30 01:42:28
diaoyuhua
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2楼2010-09-26 17:33:25
4楼2010-09-26 19:57:34
oyanxuelai
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5楼2010-09-26 20:01:20