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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE 制胶时为什么胶面出现弯曲不平
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草豆

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我认为可能是以下原因：
原因一：
可能是APS（需避光保存）失效了。溶解的时候注意放在耳边听一下，如果有啪啪的声音，说明没问题，反之，就是失效了（现配也没用），导致胶凝的不好，再加上有点漏胶，所以胶面不平。
原因二：
电泳槽没有密封好。我们是用煮沸的琼脂把各个边边缝缝都封一边（老式电泳槽），冷却后，用水检查密封性，不漏后，再灌分离胶，用水压平（如果发现水面不平的话，要及时的补满水，不然的话由于各个地方受压力不同，也会导致胶面不平）。
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11楼2010-09-17 00:24:43
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85715623

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
制交啊板底部封得不严，漏液了，导致上面不平。
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12楼2010-09-17 07:31:03
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tj_fjl

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是底下漏了！
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13楼2010-09-17 08:51:08
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mango70803575

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得有几个细节，你可以考虑一下
1、制胶板的密封性，我们一般都用夹子夹紧
2、配分离胶时APS和TEMED的使用量视当时温度而定
3、APS现用现配
4、倒入分离胶后立即水封
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过去的一切等于零，现在的一切从零开始！
14楼2010-09-17 09:27:35
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weilin1691

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该是没有凝好吧
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15楼2010-09-17 10:54:49
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qiqilao

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计是夹子没夹紧，底下漏了
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16楼2010-09-17 12:24:41
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
假如是没有凝结好，那么由于凝胶和水是不相溶的，所以即使不用水封，那么界面也必然是平的，现在不平，说明不是凝结得不好，而是凝结得太好了，注意过TEMED没？我怀疑用太多了，导致加进去时就已经有些凝结，加进去后在流得还没有平的时候就凝结，导致即使加了水也压不了了。

胶面中间稍高，猜测楼主是从中间加进去凝胶的，我喜欢从一侧加，从没有试过胶面不平，我喜欢流动的感觉。在做凝胶混匀时注意看液体的流动状态，越粘稠就表示快要凝结了，我都是在它有一点点粘稠之前就加了，所以加进去之后能够欢畅地流动。

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2010-9-17 at 14:25 ]
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
17楼2010-09-17 14:20:19
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qingbingx

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-09-17 14:20:19:
假如是没有凝结好，那么由于凝胶和水是不相溶的，所以即使不用水封，那么界面也必然是平的，现在不平，说明不是凝结得不好，而是凝结得太好了，注意过TEMED没？我怀疑用太多了，导致加进去时就已经有些凝结，加进 ...

您猜得对，我确实是从中间灌的胶，不过我TEMED加的并不多，5微升，灌胶时流动性还是和水一样
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Betterlatethannever
18楼2010-09-17 15:11:12
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qingbingx

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 草豆 at 2010-09-17 00:24:43:
我认为可能是以下原因：
原因一：
可能是APS（需避光保存）失效了。溶解的时候注意放在耳边听一下，如果有啪啪的声音，说明没问题，反之，就是失效了（现配也没用），导致胶凝的不好，再加上有点漏胶，所以胶面 ...

谢谢您的回复，APS应该没有问题，我一周前用过，都很顺利；胶也不存在漏液的情况，下面那段是我从制胶架上取下来时因没凝上流下来的，也不知道什么原因，
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Betterlatethannever
19楼2010-09-17 15:14:34
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billy5

铜虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

楼主注意下以下两点：1）APS尽量用时新配   2）TEMED的用量注意，要视情况适当增减的。。
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服气不服输！！！！！
20楼2010-09-17 15:26:11
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