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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE 制胶时为什么胶面出现弯曲不平
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Lee_Py

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
貌似楼主的胶不均匀 凝不上去 就多等会 还有你的胶是百分之几的？
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21楼2010-09-17 15:40:00
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qingbingx

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by Lee_Py at 2010-09-17 15:40:00:
貌似楼主的胶不均匀 凝不上去 就多等会 还有你的胶是百分之几的？

谢谢！开始我也以为是没混匀的缘故，后来就特别注意这一点，但并不见效，所以应该不是这个原因，我的胶是15%的
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Betterlatethannever
22楼2010-09-18 17:52:23
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Lee_Py

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by qingbingx at 2010-09-18 17:52:23:

谢谢！开始我也以为是没混匀的缘故，后来就特别注意这一点，但并不见效，所以应该不是这个原因，我的胶是15%的

真不知道 你配那么高浓度的是干什么的 我在书上看的最低的是0.5 最高的是百分之六的
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23楼2010-09-19 20:20:47
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
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最高的是可以超过6%的
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
24楼2010-09-19 20:47:00
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yanlili

金虫 (正式写手)
★
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取下胶条时，底部有水是很正常的，没什么大问题。个人认为，加进去的分离胶有时候聚丙烯酰胺不可能把所有的水都包在其网格内，下面的液体你再等它也不会凝，挥发倒是有可能。
从胶的情况看，还是因为不均匀或凝结太快导致的。lz可以先混匀后再迅速的加入APS和TEMED，再混匀。把TEMED的量减少一点。
封胶用正丁醇的效果也很好，比水要好，另外，用琼脂糖封下胶板，防止漏液。
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25楼2010-09-20 14:11:46
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wenf98

木虫 (正式写手)
★
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1:漏液 2:玻璃板不干净包括版面不干燥  3:AP加太多,
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26楼2010-09-20 14:20:53
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qingbingx

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yanlili at 2010-09-20 14:11:46:
取下胶条时，底部有水是很正常的，没什么大问题。个人认为，加进去的分离胶有时候聚丙烯酰胺不可能把所有的水都包在其网格内，下面的液体你再等它也不会凝，挥发倒是有可能。
从胶的情况看，还是因为不均匀或凝结 ...

有道理，那我用正丁醇试下
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Betterlatethannever
27楼2010-09-21 12:39:50
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luozhen2008

木虫 (正式写手)
可能跟tris-hcl的PH有点关系，胶配好后多摇下保证摇匀了再灌胶
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28楼2010-09-21 12:53:28
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小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)
★
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AP不存在新配 旧配的问题。去年我配的AP 今年我用都还行。
2玻璃板自然晾干为好
分离胶用水压平后，尽量吸干过多的水
灌胶时最好从一侧开始，尤其灌浓缩胶时，你从中间开灌时，可能会灌得太快导致 分离胶处的水不能排净。从一侧的话引压力缓慢灌胶水基本排净。
从你的板子来看，底部有气泡，原因有2
  1 。 板子间的密闭不好
  2.   你当天的灌胶速度较快，而且你一直是从中间灌的，更会导致这种结果的出现。
假如你是一板一板的制胶的话，TEMED在你常用的用量下，不会导致图片现象的发生。


说了这么多废话，没用一句有用的。做实验的心态很重要的，过急，过躁？当时有其他的事情也要去做？你应该也算个跑胶的老手了。方法，药品是不存在问题的，问题出在自己。
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29楼2010-09-21 19:08:55
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师
★
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我倒觉得胶凝的太快、不均匀所致！TEMED和APS量适当减少试试！
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大家共同交流、共同提高！！！
30楼2010-09-21 19:28:27
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