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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】原核表达蛋白分子量偏大
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cgt713

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】原核表达蛋白分子量偏大 已有7人参与

当时设计的分子量是16K，表达出来蛋白跑SDS-PAGE 是20K，请帮忙解释下 谢谢
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1楼 2010-09-16 14:59:10
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师
★
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我记得在SDS-PAGE电泳结果中出现分子量10%的差距是属于正常的！可你这个稍微大了点，也未必是蛋白质错误表达，可以纯化点样品测N端和C端氨基酸序列来验证表达的蛋白质的正确性！不过这样实验似乎费用和难度都很大！不过如果完成学位论文，我觉得值得做这些验证实验！
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大家共同交流、共同提高！！！
16楼2010-09-19 19:08:47
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xiaoyu9940

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有没有纯化标记什么的，你算在里面了吗 例如GST
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2楼2010-09-16 15:08:33
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sfxt001

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要算上Tag的大小，还有有时候算出来的分子量不一定准。
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3楼2010-09-16 15:12:54
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月月大可

木虫 (著名写手)
二楼的，GST标签26KD

说句实话这种通过SDS-PAGE获取的表观分子量略大于理论分子量是很正常的现象。

你也要考虑起始密码子开始区有没有非你目的蛋白的氨基酸引入，下游是否引入终止密码子，没有引入下游也会有非你目的蛋白的氨基酸表达。
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4楼2010-09-16 16:40:48
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