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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

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专业: 微生物学

[交流] 【问题反馈】质粒双酶切切下120bp每次都看不到？已有18人参与

质粒6800bp,双酶切后切下120bp,每次跑电泳都看不到120的条带。另外一条大的条带很亮，是不是没有切开呢，反正用于下步连接也不出结果，不吝赐教！

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1楼 2010-09-14 23:23:43

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)

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专业: 动物遗传学

能连上了不一定就说明是双酶切成功了，单切的也能连上啊。如果已经连完了，克隆出来以后可以试试再切一下质粒，如果质粒那两个酶还是能很成功的切开那就没问题了，否则之前的实验还是没切开。有些时候也可能是内切酶有核酸外切酶的污染，把长片段和短片段的末端都给切掉了不少，这时候电泳检测是看不出来的，几千的片段如果被核酸外切酶给切掉一部分那电泳检测还是能看得到，但120BP的如果做酶切的时候有核酸外切酶污染的情况就基本看不到了。
电泳检测无异常，连接也能连上，但如果质粒再切就切不开了，克隆就也不算成功了