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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】构建超表达载体时引物的设计
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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】构建超表达载体时引物的设计

因为之前所用的试剂盒的原因，设计引物时需要在引物前多加四个碱基，现在要另换试剂盒，不知道这四个多出的碱基是否会造成阅读框位移？ 此外，想了解一个最基本的问题：在5，UTR设计引物构建超表达载体时，是不是从引物开始到ATG必须是3的倍数，这样才不会造成阅读框位移？我的观点是，因为DNA先要转录成RNA，然后才翻译成蛋白，所以即使不是三的倍数，也不会造成位移。 希望了解的同学给予答复。
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1楼 2010-09-12 19:44:20
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-13 12:15:40
gdongli8325(金币+5): 2010-09-13 16:27:12
换了试剂盒，换了载体吗？如果换了载体就要比对一下新的载体的序列

构建表达载体，楼主使用的是待表达基因的ATG还是载体的ATG，如果是载体的，就要注意载体ATG和表达基因的ATG之间的序列要是3的倍数，如果不是要用引物来调整，如果是使用自己的ATG，那就不用考虑了。这跟先转录后翻译没有关系，因为转录的片段比载体的表达阅读框要长，翻译还是从第一个ATG开始的
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2楼2010-09-12 22:25:01
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biotech113

铜虫 (初入文坛)
gdongli8325(金币+2): 2010-09-13 16:27:23
楼上正解！
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不抛弃，不放弃！
3楼2010-09-13 11:19:46
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