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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】构建超表达载体时引物的设计

因为之前所用的试剂盒的原因,设计引物时需要在引物前多加四个碱基,现在要另换试剂盒,不知道这四个多出的碱基是否会造成阅读框位移? 此外,想了解一个最基本的问题:在5,UTR设计引物构建超表达载体时,是不是从引物开始到ATG必须是3的倍数,这样才不会造成阅读框位移?我的观点是,因为DNA先要转录成RNA,然后才翻译成蛋白,所以即使不是三的倍数,也不会造成位移。 希望了解的同学给予答复。
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-13 12:15:40
gdongli8325(金币+5): 2010-09-13 16:27:12
换了试剂盒,换了载体吗?如果换了载体就要比对一下新的载体的序列

构建表达载体,楼主使用的是待表达基因的ATG还是载体的ATG,如果是载体的,就要注意载体ATG和表达基因的ATG之间的序列要是3的倍数,如果不是要用引物来调整,如果是使用自己的ATG,那就不用考虑了。这跟先转录后翻译没有关系,因为转录的片段比载体的表达阅读框要长,翻译还是从第一个ATG开始的
2楼2010-09-12 22:25:01
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biotech113

铜虫 (初入文坛)

gdongli8325(金币+2): 2010-09-13 16:27:23
楼上正解!
不抛弃,不放弃!
3楼2010-09-13 11:19:46
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