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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】我老师设计的对吗？
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lxx213

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】我老师设计的对吗？ 已有6人参与

大家好，我是一个分子生物学新手，关于分子克隆方面做的实验不多，关于TEV酶切位点的问题让我十分困惑！请大家帮我解决一下。
TEV酶常被用于分子克隆中，用于目的蛋白与融合标签之间插入，以切除融合标签等，应在短肽ENLYFQG的Q和G之间切开，我的实验中TEV的基因序列是老师帮忙设计的，可是基因翻译后的序列是ENLYFQGSG，我想问一下大侠们，这样有没有问题？结果方面会不会受影响？
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1楼 2010-09-04 16:40:41
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linysm

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你老板可能根据经验多加了两个保护氨基酸便于酶切，应该不影响吧。
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2楼2010-09-04 17:27:09
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lxx213

新虫 (初入文坛)

可是？？

引用回帖:
Originally posted by lxx213 at 2010-09-04 16:40:41:
大家好，我是一个分子生物学新手，关于分子克隆方面做的实验不多，关于TEV酶切位点的问题让我十分困惑！请大家帮我解决一下。
TEV酶常被用于分子克隆中，用于目的蛋白与融合标签之间插入，以切除融合标签等，应在 ...

可是，我们是想研究目的蛋白的结构与功能之间的关系，如果这样，结构难道不受影响吗？？
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3楼2010-09-07 08:36:34
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lxx213

新虫 (初入文坛)

可是？？

引用回帖:
Originally posted by linysm at 2010-09-04 17:27:09:
你老板可能根据经验多加了两个保护氨基酸便于酶切，应该不影响吧。

可是，我们是想研究目的蛋白的结构与功能之间的关系，如果这样，结构难道不受影响吗？？
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4楼2010-09-07 08:38:29
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linysm

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lxx213 at 2010-09-07 08:38:29:

可是，我们是想研究目的蛋白的结构与功能之间的关系，如果这样，结构难道不受影响吗？？

到时候多的地方都被切掉了，怕什么。
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5楼2010-09-07 08:59:57
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
★ ★
lstt09nk(金币+2):感谢回复~ 2010-09-08 09:44:06
1、保护氨基酸一般不影响，多数切除了。
2、查看一下加入的氨基酸与目的蛋白连入后对其水溶性等等参数的影响，软件即可实现，很多在线的结构预测也能算算。
3、根据实验，看看有其他的序列可以设计么。
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6楼2010-09-07 09:30:11
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lxx213

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by linysm at 2010-09-07 08:59:57:

到时候多的地方都被切掉了，怕什么。

我们设计的是ENLYFQGSG，理论上是ENLYFQG，在Q和G之间切开啊~~~那不就多了SG吗？
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7楼2010-09-08 08:37:40
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):解释的不错~ 2010-09-08 09:44:35
引用回帖:
Originally posted by lxx213 at 2010-09-08 08:37:40:

我们设计的是ENLYFQGSG，理论上是ENLYFQG，在Q和G之间切开啊~~~那不就多了SG吗？

GSG是一般常用的连接蛋白的柔性肽，对蛋白功能几乎没有影响，所以肯定是你老板有意这样设计的，用蛋白酶切后会在n端多SG
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8楼2010-09-08 08:43:27
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lxx213

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-09-08 08:43:27:


GSG是一般常用的连接蛋白的柔性肽，对蛋白功能几乎没有影响，所以肯定是你老板有意这样设计的，用蛋白酶切后会在n端多SG

哦，谢谢……
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9楼2010-09-09 15:03:39
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
确实是新手啊.呵呵
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10楼2010-09-09 16:08:32
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