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yuanya225

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】液相色谱 基体效应

本人做中药中有效成分提取-液相色谱分析,对于某种特定有效成分的定量我是这样进行的。
先用甲醇配置该有效成分的一系列标准溶液,进液相色谱分析,以标样浓度为横坐标,液相色谱峰面积为纵坐标绘出标准曲线。
然后将中药提取液在相同色谱条件下进HPLC分析,得出峰面积,接着根据标准曲线方程求出中药中该有效成分浓度,这样做对吗?
这种定量的方法是叫外标法还是内标法?
基体效应怎么校正?
急急急。。。。。。。。
请各位大侠们指教!!!
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qingfanqie

金虫 (小有名气)

是外标法,可以用提取液做为溶液,配制成标准溶液,要选择标准曲线中的一点,与甲醇配制标准的响应面积作对比
2楼2010-09-02 11:32:07
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yuanya225

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by qingfanqie at 2010-09-02 11:32:07:
是外标法,可以用提取液做为溶液,配制成标准溶液,要选择标准曲线中的一点,与甲醇配制标准的响应面积作对比

请问怎么对比呢?原提取液里有该有效成分(假如有a g),如若再添加有效成分的标样(假如是b g),那峰面积(a+b g)肯定比用甲醇配置(同样是b g)的大;
是不是得先除掉提取液中的有效成分?可怎么除呢?
还有比值在哪个范围说明基体效应影响不大呢?
要是很大的话,怎么对其进行校正,然后对中药中有效成分准确定量呢?
谢谢了!!!
3楼2010-09-02 12:19:54
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qingfanqie

金虫 (小有名气)

yuanya225(金币+10): 2010-09-07 10:52:55
只能理论上认为提取已经完全,对于加入的b是已知量,用总的面积减去提取液的面积作为b的面积,然后与标曲该点的面积对比,以此判断基体效应程度。但对于这类实验的多大范围基体效应影响不大,还要查一些文献资料吧,不敢妄说。如果大,可以考虑用提取液配制标曲来进行定量

都是个人看法,请大家指正
4楼2010-09-02 13:06:22
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兔子不乖

金虫 (正式写手)

yuanya225(金币+5): 2010-09-07 10:53:08
考察基体效益,做回收率试验,如果能达到要求,说明基体不影响;还要看基体是否出峰,做空白试验。如果都能通过,就行了。如果不行,加内标,以内标定量。
5楼2010-09-02 15:06:36
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