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bluewondeer

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[交流] 【分享】石蜡切片法已有4人参与

顾名思义，石蜡切片法是用石蜡作为包埋剂的一种显微制片方法，是显微技术中最重要最常用的方法之一。它的优点是能够切出薄而均匀的连续切片，便于进行器官的三维重构。此法多用手摇切片机切片。对于较硬的材料，也可以使用滑走切片机。
石蜡切片法的操作程序包括：取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、修块、切片、粘片、染色和封片。
(1)取材：选取生长良好、有代表性的目标材料，洗净。用锋利的双面刀片截取材料，动作要迅速。材料的大小不超过0.5~lcm3。
(2)固定：将选取的材料放人固定液中，固定液的体积大约是材料的20倍。固定是用化学试剂迅速杀死细胞的过程。目的是尽可能使细胞中的各个组分保持生活状态的结构，并固定在它们原来的位置上。常用的固定剂有FAA、卡诺和纳瓦兴固定液。前两种固定液的固定时间是2~24h，后者是12~48h。FAA既是良好的固定剂，也是保存剂，材料可以在其中长久保存。而卡诺固定液和纳瓦兴固定液则不能长久保留材料，固定后，应尽快清洗，转人70%酒精中保存。若材料含有空气，固定时需要抽气。
(3)脱水：固定好的材料经各级酒精脱水至纯酒精。各级酒精的浓度为：30%、50%、70%、85%、95%和l0O%。 (4)透明：纯酒精中的植物材料用l／2纯酒精和l／2二甲苯混合液处理2~3h，转入纯二甲苯中，处理两次。由于石蜡溶于二甲苯而不溶于酒精，因此透明的作用除了使材料变得透明外，另一方面是将材料中的酒精除去。
(5)浸蜡：使石蜡慢慢溶于透明剂中，然后完全取代透明剂进人植物组织中。一般将透明好的材料换入新的二甲苯中，然后加入等体积的碎蜡，置于40℃左右的温箱中。随着碎蜡的溶解，不断加入碎蜡使石蜡饱和为止。时间大约l~2天。
(6)包埋：浸蜡后，在60℃的温箱中，换两次已溶解的纯蜡，每次约2h。然后将材料和石蜡一起倒人小纸盒中，用加热的镊子迅速把材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐，再将小纸盒平放于冷水中，使其很快凝固。
(7)修块：将包埋好的材料切割成小块，每个小块包含一个材料。然后按需要的切面将蜡块切成梯形，切面在梯形的上部，注意上部矩形的对边平行。梯形的底部用烧热的蜡铲将其固定在木块上。
(8)切片：用手摇切片机将蜡块切成连续的蜡带。切片时，把切片刀夹在刀架上，再把木块夹在固定装置上，调整固着位置，使材料的切与面刀口平行。然后调整厚度，转动切片机切片。
(9)粘片：粘片是将切好的蜡片粘在载玻片上。在洁净的载玻片上，加少许粘贴剂并涂匀。然后加几滴3%福尔马林或蒸馏水，用解剖针或镊子轻轻将蜡片放在液面上。再将带有蜡片的载玻片放在温台上，温台的温度在45℃左右，蜡片受热后慢慢伸直。用滤纸吸去多余液体，表面烤干后，转入30℃温箱放置一昼夜。
(10)染色和封片：切片干燥后，可以选用不同的染色法染色。染色前先要进行脱蜡，使材料内外的石蜡溶解。然后根据配制染液的溶液情况，决定是否需要复水。下面以植物生物学中最常见的番红-固绿染色方法，说明染色与制片过程。

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