| 查看: 1630 | 回复: 4 | ||||
bluewondeer银虫 (小有名气)
|
[交流]
【分享】石蜡切片法 已有4人参与
|
|
顾名思义，石蜡切片法是用石蜡作为包埋剂的一种显微制片方法，是显微技术中最重要最常用的方法之一。它的优点是能够切出薄而均匀的连续切片，便于进行器官的三维重构。此法多用手摇切片机切片。对于较硬的材料，也可以使用滑走切片机。 石蜡切片法的操作程序包括：取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、修块、切片、粘片、染色和封片。 (1)取材：选取生长良好、有代表性的目标材料，洗净。用锋利的双面刀片截取材料，动作要迅速。材料的大小不超过0.5~lcm3。 (2)固定：将选取的材料放人固定液中，固定液的体积大约是材料的20倍。固定是用化学试剂迅速杀死细胞的过程。目的是尽可能使细胞中的各个组分保持生活状态的结构，并固定在它们原来的位置上。常用的固定剂有FAA、卡诺和纳瓦兴固定液。前两种固定液的固定时间是2~24h，后者是12~48h。FAA既是良好的固定剂，也是保存剂，材料可以在其中长久保存。而卡诺固定液和纳瓦兴固定液则不能长久保留材料，固定后，应尽快清洗，转人70%酒精中保存。若材料含有空气，固定时需要抽气。 (3)脱水：固定好的材料经各级酒精脱水至纯酒精。各级酒精的浓度为：30%、50%、70%、85%、95%和l0O%。 (4)透明：纯酒精中的植物材料用l／2纯酒精和l／2二甲苯混合液处理2~3h，转入纯二甲苯中，处理两次。由于石蜡溶于二甲苯而不溶于酒精，因此透明的作用除了使材料变得透明外，另一方面是将材料中的酒精除去。 (5)浸蜡：使石蜡慢慢溶于透明剂中，然后完全取代透明剂进人植物组织中。一般将透明好的材料换入新的二甲苯中，然后加入等体积的碎蜡，置于40℃左右的温箱中。随着碎蜡的溶解，不断加入碎蜡使石蜡饱和为止。时间大约l~2天。 (6)包埋：浸蜡后，在60℃的温箱中，换两次已溶解的纯蜡，每次约2h。然后将材料和石蜡一起倒人小纸盒中，用加热的镊子迅速把材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐，再将小纸盒平放于冷水中，使其很快凝固。 (7)修块：将包埋好的材料切割成小块，每个小块包含一个材料。然后按需要的切面将蜡块切成梯形，切面在梯形的上部，注意上部矩形的对边平行。梯形的底部用烧热的蜡铲将其固定在木块上。 (8)切片：用手摇切片机将蜡块切成连续的蜡带。切片时，把切片刀夹在刀架上，再把木块夹在固定装置上，调整固着位置，使材料的切与面刀口平行。然后调整厚度，转动切片机切片。 (9)粘片：粘片是将切好的蜡片粘在载玻片上。在洁净的载玻片上，加少许粘贴剂并涂匀。然后加几滴3%福尔马林或蒸馏水，用解剖针或镊子轻轻将蜡片放在液面上。再将带有蜡片的载玻片放在温台上，温台的温度在45℃左右，蜡片受热后慢慢伸直。用滤纸吸去多余液体，表面烤干后，转入30℃温箱放置一昼夜。 (10)染色和封片：切片干燥后，可以选用不同的染色法染色。染色前先要进行脱蜡，使材料内外的石蜡溶解。然后根据配制染液的溶液情况，决定是否需要复水。下面以植物生物学中最常见的番红-固绿染色方法，说明染色与制片过程。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 仪器设备 |
» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有194人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 石蜡切片拍照有临时封片法吗？
已经有8人回复
- 石蜡切片步骤【已搜索无重复】
已经有303人回复
- 【求助】石蜡组织标本中提取DNA方法
已经有4人回复
- 【交流】切片机
已经有9人回复
- 【求助/交流】做过石蜡切片的朋友们，你们抽气是用什么工具的啊？
已经有45人回复
- 【分享】组织石蜡包埋和切片技术——挺实用的
已经有34人回复
- 【求助/交流】植物石蜡切片技术软化剂
已经有10人回复
liyangmiscap
木虫 (著名写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 5805.9
- 散金: 882
- 红花: 10
- 帖子: 1349
- 在线: 485.2小时
- 虫号: 931189
- 注册: 2009-12-20
- 性别: MM
- 专业: 中药学其他科学问题
2楼2010-09-02 13:18:59
非羽流觞
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 45.5
- 帖子: 10
- 在线: 3.6小时
- 虫号: 2800275
- 注册: 2013-11-14
- 性别: GG
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
3楼2013-11-18 16:36:59
 |
4楼2014-06-04 09:22:13
|
好 [ 发自小木虫客户端 ] |
5楼2014-09-12 19:50:03
10