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[交流]
【求助/交流】加裂解液后离心到底需不需要冷冻离心？困惑。。。
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记得前一段时间和大家交流过这个问题，我在超声破碎大肠杆菌，加裂解液后离心，此时需不需要冷冻离心，大家意见很一致，为了防止蛋白降解，最好低温离心。可是我现在在一篇文献（中文）中看到这样的一段话： 在加入蛋白裂解液之前，通常需要通过低温及添加蛋 白酶抑制剂来减少蛋白的降解，因此样品一般宜保持在4℃左 右的低温，此时操作常选择在冰浴中进行，离心时设温4℃。 在加入蛋白裂解液之后，由于裂解液的主要成分尿素在低温下 会因溶解度的下降而析出，导致裂解液成分改变，影响蛋白样 品的溶解。故加入裂解液后样品置室温溶解即可。此外，还应 避免样品温度过高。尿素在高于37℃时易造成蛋白的氨甲酰 化修饰。因此加入裂解液后样品室温放置，需要离心时设定温 度以15~20℃为宜。样品制备完成后再将其分装冻存于一8O ℃。 现在我很困惑，到底哪种说法才是最好的呢？ |
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