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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】加裂解液后离心到底需不需要冷冻离心？困惑。。。
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peximin

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】加裂解液后离心到底需不需要冷冻离心？困惑。。。

记得前一段时间和大家交流过这个问题，我在超声破碎大肠杆菌，加裂解液后离心，此时需不需要冷冻离心，大家意见很一致，为了防止蛋白降解，最好低温离心。可是我现在在一篇文献（中文）中看到这样的一段话：
在加入蛋白裂解液之前，通常需要通过低温及添加蛋
白酶抑制剂来减少蛋白的降解，因此样品一般宜保持在4℃左
右的低温，此时操作常选择在冰浴中进行，离心时设温4℃。
在加入蛋白裂解液之后，由于裂解液的主要成分尿素在低温下
会因溶解度的下降而析出，导致裂解液成分改变，影响蛋白样
品的溶解。故加入裂解液后样品置室温溶解即可。此外，还应
避免样品温度过高。尿素在高于37℃时易造成蛋白的氨甲酰
化修饰。因此加入裂解液后样品室温放置，需要离心时设定温
度以15~20℃为宜。样品制备完成后再将其分装冻存于一8O ℃。
现在我很困惑，到底哪种说法才是最好的呢？
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1楼 2010-08-31 08:51:01
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烟大考研

金虫 (正式写手)
peximin(金币+1): 2010-08-31 10:10:48
我们加了酶抑制剂后，用的室温离心，
赞一下 回复此楼
心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
3楼2010-08-31 09:17:17
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linysm

银虫 (小有名气)
★
peximin(金币+1): 2010-08-31 10:10:56
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-08-31 11:58:54
加了尿素了，蛋白已经没有活性了，还担心么？一般在尿素中不用冷冻，但温度不宜过高
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4楼2010-08-31 09:25:38
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laren_

铜虫 (初入文坛)
peximin(金币+1): 2010-08-31 10:11:04
我们实验室裂解大肠杆菌 原来是加裂解液超声不离心 后来换成不加裂解液超声后低温离心
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5楼2010-08-31 09:28:20
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