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可可猫

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒转入大肠杆菌怎么都不长啊 已有11人参与

最近将老师从国外带回来的质粒转入大肠杆菌然后抽提,该质粒是Amp抗性的,热转后铺到平板上一个克隆都没有。

我用的是200微升的感受态里面加五微升质粒,质粒浓度是140ng/微升

所用的培养基的Amp浓度是100ng/ml

感觉应该是没转进去,不知道问题到底出在什么地方

请各位有经验的师兄师姐帮我看看哈
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小WAY

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也在做类似的实验,做个阴性对照试试 呢
12楼2013-01-15 21:53:49
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linysm

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-08-29 12:49:14
质粒可能不行了,要不就是感受态效价太低,建议做效价高一点的感受态;要不就把目的条带切下来,自己重新克隆。
2楼2010-08-29 10:40:45
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夜龙舞

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-08-29 12:49:34
化学转化效率比较低,不行得话你就试一下电转化。
3楼2010-08-29 11:01:33
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周_yan

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-08-29 12:49:41
我认为有以下几个原因:
一、质粒时间久了,不行了。
二、感受态不行了,
三、Amp失效了,
四、转化时操作不规范。
建议弄点超感,重新配板,操作时注意一下。如果这些都没问题,仍不长,就重新弄质粒吧。
4楼2010-08-29 11:08:07
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