应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】试验失败了，请高手指点
41/1返回列表
查看: 823  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lysogen

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】试验失败了，请高手指点 已有3人参与

做分子试验时，跑凝胶的结果条带上连Positive control 的条带都没出来。第一次做的时候是有的，但第二，三次就没有。期间，自己的个人操作应该没多大差别。现怀疑是否因为过程中使用的 酶 因为反复冻融而失活。

用的试剂盒是：Takara one step rna pcr kit (amv) 商品编号DRR024A。保存在-20摄氏度，用的时候拿出来，因为比较昂贵，本身又没有小包装，用完了再放回去。
这会不会是一个致命的因素呢？

大家若是遇到过这种情况，是这个问题的话，那么该如何避免呢？或者，有什么好的方法建议，有什么经验技巧，都很希望大家能指点一二。

另外，实际操作中，如果我做9个反应管，那么我大概就取10份出来，先混合好，然后再分装。那么我混合的时候是把所有的东西都全混合，还是只混合水，dNTP，氯化镁，buffer，分装；而那些引物，RNA抑制剂，各种酶（AMV逆转录酶，Taq酶）就另外一管一管的加。


急盼高手指点。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
放弃是一种智慧，缺陷是一种恩惠
1楼 2010-08-27 23:24:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

plantaqp

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~顺便友情提示一下，身体是革命的本钱，应该早点休息哦~ 2010-08-28 09:18:55
第一个问题如果你第二第三次没有露加什么，那就换个新的试剂盒试试吧。酶一般都是保存在甘油中的不存在反复冻融的问题（你的试剂盒是这样么？）

能一起混合好的当然一起加了。

PS，好有钱的实验室哦，我们都是先RT再pcr的。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-08-28 04:07:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
AMV的虽然贵，但是效果不见得就比MLV强，因为从片段长度的角度去看，MLV还是有优势的
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-08-28 09:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

怎么都行

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
LZ是直接用RNA做的模板吧，你的实验不能重复可能与模板降解也有很大关系，因为我们曾经遇到过这种情况，即使加了RNA酶抑制剂，RNA模板依然会降解，最好像2楼说的那样，先反转录成cDNA,用cDNA做模板，保存的时间还能长一些。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-08-28 10:47:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lysogen 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:20 by ilovexiaobin
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 0703化学调剂 +11 妮妮ninicgb 2026-03-15 15/750 2026-03-21 19:15 by ColorlessPI
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +3 NIFFFfff 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:23 by luoyongfeng
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666！
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 350求调剂 +5 weudhdk 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:04 by luoyongfeng
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭