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【求助/交流】试验失败了，请高手指点已有3人参与
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做分子试验时，跑凝胶的结果条带上连Positive control 的条带都没出来。第一次做的时候是有的，但第二，三次就没有。期间，自己的个人操作应该没多大差别。现怀疑是否因为过程中使用的 酶 因为反复冻融而失活。 用的试剂盒是：Takara one step rna pcr kit (amv) 商品编号DRR024A。保存在-20摄氏度，用的时候拿出来，因为比较昂贵，本身又没有小包装，用完了再放回去。 这会不会是一个致命的因素呢？ 大家若是遇到过这种情况，是这个问题的话，那么该如何避免呢？或者，有什么好的方法建议，有什么经验技巧，都很希望大家能指点一二。 另外，实际操作中，如果我做9个反应管，那么我大概就取10份出来，先混合好，然后再分装。那么我混合的时候是把所有的东西都全混合，还是只混合水，dNTP，氯化镁，buffer，分装；而那些引物，RNA抑制剂，各种酶（AMV逆转录酶，Taq酶）就另外一管一管的加。 急盼高手指点。 |
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2楼2010-08-28 04:07:36