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lysogen

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 750
帖子: 189
在线: 10.8小时
虫号: 452756
注册: 2007-11-05
性别: GG
专业: 食品科学基础

[交流] 【求助/交流】试验失败了，请高手指点已有3人参与

做分子试验时，跑凝胶的结果条带上连Positive control 的条带都没出来。第一次做的时候是有的，但第二，三次就没有。期间，自己的个人操作应该没多大差别。现怀疑是否因为过程中使用的酶因为反复冻融而失活。

用的试剂盒是：Takara one step rna pcr kit (amv) 商品编号DRR024A。保存在-20摄氏度，用的时候拿出来，因为比较昂贵，本身又没有小包装，用完了再放回去。
这会不会是一个致命的因素呢？

大家若是遇到过这种情况，是这个问题的话，那么该如何避免呢？或者，有什么好的方法建议，有什么经验技巧，都很希望大家能指点一二。

另外，实际操作中，如果我做9个反应管，那么我大概就取10份出来，先混合好，然后再分装。那么我混合的时候是把所有的东西都全混合，还是只混合水，dNTP，氯化镁，buffer，分装；而那些引物，RNA抑制剂，各种酶（AMV逆转录酶，Taq酶）就另外一管一管的加。

急盼高手指点。

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