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爱老虎油920金虫 (正式写手)
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[交流]
【求助】HPLC分析流动相选择问题——请教 已有5人参与
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刚在经验版块发的贴，后来觉得分析版块更贴近我这个问题一点，所以也来这里求助下，不知是否有更多更好的idea，多多益善！呵 最近，用HPLC分析样品，底物和产物分别是酰胺和酸，我用60%的乙腈水溶液为流动相，结果只在2.5出来一个峰，好像这两种物质没分开，，，是我的流动相极性太大了吗？我是否应该提高乙腈和水的比例，降低流动相的极性 来尝试下， 请问，是否我的流动相极性太高导致这样的结果，这样处理是否合理，，还有别的其他降低流动相极性的方法吗？？ 请各位学长姐的指教！不胜感激 我增加了水的比例，用20%乙腈水溶液做流动相，还是没有出来酸和酰胺的峰，但原来那个峰的保留时间变长了，原来在2.5，现快到4min了，那个峰开始出现分叉了，是要分开的预兆吗？但现在乙腈的比例乙腈很小啦，，是不是要换别的流动相了呢？应该换什么和什么呢？ [ Last edited by 爱老虎油920 on 2010-8-30 at 12:44 ] |
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883475 
银虫 (小有名气)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
chiraler(金币+1):thanks for your response 2010-08-31 18:07:10
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chiraler(金币+1):thanks for your response 2010-08-31 18:07:10
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楼主，流动相是极性太太小了，就是有机想的比例太大了，你可以走梯度嘛 10%的乙腈开始吧，15至20分钟乙腈比例升到50%就行； 水相建议用磷酸盐缓冲液调节pH至3.0左右 如果还不行，那就用可以走100%水的色谱柱试试，或者选长柱，或者选含碳量高的柱，总之就是为了延长保留时间，改善分离效果～～～ 另:酰胺的性质一般是比较稳定的，不会轻易发生分解等反应 [ Last edited by 883475 on 2010-8-27 at 15:29 ] |
7楼2010-08-27 15:26:28
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chiraler(金币+1):thanks for your response 2010-08-31 18:06:55
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3楼2010-08-27 08:40:07
4楼2010-08-27 10:35:47
爱老虎油920
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