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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 其他分析 » 【求助】HPLC分析流动相选择问题——请教
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爱老虎油920

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】HPLC分析流动相选择问题——请教 已有5人参与

刚在经验版块发的贴，后来觉得分析版块更贴近我这个问题一点，所以也来这里求助下，不知是否有更多更好的idea，多多益善！呵   

    最近，用HPLC分析样品，底物和产物分别是酰胺和酸，我用60%的乙腈水溶液为流动相，结果只在2.5出来一个峰，好像这两种物质没分开，，，是我的流动相极性太大了吗？我是否应该提高乙腈和水的比例，降低流动相的极性 来尝试下，
请问，是否我的流动相极性太高导致这样的结果，这样处理是否合理，，还有别的其他降低流动相极性的方法吗？？
请各位学长姐的指教！不胜感激


    我增加了水的比例，用20%乙腈水溶液做流动相，还是没有出来酸和酰胺的峰，但原来那个峰的保留时间变长了，原来在2.5，现快到4min了，那个峰开始出现分叉了，是要分开的预兆吗？但现在乙腈的比例乙腈很小啦，，是不是要换别的流动相了呢？应该换什么和什么呢？

[ Last edited by 爱老虎油920 on 2010-8-30 at 12:44 ]
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1楼 2010-08-27 00:38:36
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646902541

木虫 (小有名气)
★
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有一定的关系
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2楼2010-08-27 08:15:29
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clyinsui

禁虫 (小有名气)
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chiraler(金币+1):thanks for your response 2010-08-31 18:06:55
本帖内容被屏蔽
3楼2010-08-27 08:40:07
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hustyookie

金虫 (正式写手)
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chiraler(金币+1):thanks for your response 2010-08-31 18:07:01
酰胺和酸极性都比较大,你用乙腈和水作流动相,用的是反相色谱,当然不合适了.

另外,检测器是什么?如果是紫外的话对脂肪链酸够呛
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4楼2010-08-27 10:35:47
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爱老虎油920

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by clyinsui at 2010-08-27 08:40:07:
我很纳闷，刚刚查了一下酰胺的性质，它在水中是不稳定的啊（很不稳定，遇水即完全水解），那么你采用乙腈水作为流动相是否合适？

酰胺是个弱碱，在水中不会水解的
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5楼2010-08-27 14:58:37
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爱老虎油920

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hustyookie at 2010-08-27 10:35:47:
酰胺和酸极性都比较大,你用乙腈和水作流动相,用的是反相色谱,当然不合适了.

另外,检测器是什么?如果是紫外的话对脂肪链酸够呛

是用紫外检测的，我这个酰胺有个杂环，吡咯烷的，不过用的也是极端波长。
两种物质的极性多少目前还没查过，，酸的极性要比酰胺大点。
不知可不可以给点建议，用什么流动相？感激不尽！
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6楼2010-08-27 15:02:32
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883475

银虫 (小有名气)
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chiraler(金币+1):thanks for your response 2010-08-31 18:07:10
楼主，流动相是极性太太小了，就是有机想的比例太大了，你可以走梯度嘛
10%的乙腈开始吧，15至20分钟乙腈比例升到50%就行；
水相建议用磷酸盐缓冲液调节pH至3.0左右

如果还不行，那就用可以走100%水的色谱柱试试，或者选长柱，或者选含碳量高的柱，总之就是为了延长保留时间，改善分离效果～～～

另:酰胺的性质一般是比较稳定的，不会轻易发生分解等反应

[ Last edited by 883475 on 2010-8-27 at 15:29 ]
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7楼2010-08-27 15:26:28
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