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【求助/交流】有做DGGE的虫友们来帮帮忙啊
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惟我独尊
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[交流]
【求助/交流】有做DGGE的虫友们来帮帮忙啊
已有3人参与
本人正DGGE几个月了 经历了艰难险阻终于到了切胶回收测序这一步了。呵呵 ,请问大家做DGGE的切胶回收步骤都是怎么做的 啊?有没有专门的DGGE胶回收试剂盒啊,我知道有卖琼脂糖和聚丙烯酰胺胶回收试剂盒的 , 能用来做DGGE胶回收吗?如果没有试剂盒,大家都是怎么做的啊 ,谢谢指导啊。期待中。。。。
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2010-08-23 16:31:26
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2455522楼
:
Originally posted by
uneei
at 2012-05-11 14:01:38:
银染就可以啊,可以切胶回收,加水,捣碎,65℃水浴,离心4℃过夜,第二天做PCR扩增出来效果挺好的。
你在紫外灯下切胶,是眼睛直视吗?没有隔着塑料板或者玻璃啥的?我在紫外灯下切过琼脂糖的胶,也还好啊,难 ...
有隔着伯乐的那个防护板,最开始紫外切琼脂糖切惯了就没想带护目镜,而且切了太长时间了,同志们一定要注意,切胶时间不能超过半小时,防护也要做好,而且会变黑,手和脸部都会,要遮住!都过了1个多月了,眼睛还会疼
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16楼
2012-05-14 10:36:09
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★
amisking(金币+1):欢迎分享经验! 2010-08-23 21:01:15
惟我独尊(金币+2):谢谢你的及时回复 2010-08-27 10:46:05
我们实验室就是没有胶回收试剂盒,我们一般用枪头切胶,于TE中过夜,第二天做PCR(带GC夹子的引物),然后再DGGE检验是否纯带,若纯就再次PCR(不带GC夹子),这样就可以把PCR产物送去测序了
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2楼
2010-08-23 17:37:43
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谢谢楼上的帮助,再弱弱的问一句:你们最初做DGGE的上样DNA样品的PCR引物也用的带GC夹子的吗,我的没用 会有很大影响吗?
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3楼
2010-08-23 23:04:40
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Originally posted by
惟我独尊
at 2010-08-23 23:04:40:
谢谢楼上的帮助,再弱弱的问一句:你们最初做DGGE的上样DNA样品的PCR引物也用的带GC夹子的吗,我的没用 会有很大影响吗?
做DGGE上样用的PCR都要用GC夹子吧!不用的话是做不出来的!
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4楼
2010-08-24 11:45:08
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