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qian_me

应助: (幼儿园)
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[交流] 【求助/交流】转染后的Hela S3行免疫荧光后在显微镜下观察，无图像，失败原因探讨。已有5人参与

我是分子生物实验新手，今天对转染后的Hela S3进行免疫荧光，然后在显微镜下观察，任何细胞的影子都没有，觉得奇怪的地方是，我想不出原因，因为此前进行两次类似的实验都有细胞成像，这次步骤上完全是重复以往的，除了转染的基因不同以外，其他都一样。上周五对细胞进行固定，分别应用4%PFA, 0.5% Triton X-20, 1% Perfect Blocking，进行固定，后存入冰箱冷藏，这周一开始加一抗和二抗，以及核染色。此前做过两次，步骤相同，都获成功，此次失败不知有哪些原因可以导致，请高手们指教！多谢！

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1楼 2010-08-16 21:32:34

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qian_me

应助: (幼儿园)
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虫号: 805519

呵呵，谢谢这位回帖的朋友～
原因解开了，为了不给初学者带来困扰，我赶紧来自行了断下！
其实是这次质粒TAG不同，所以一抗和二抗不一样，就是说抗体加错了～
都怪带我的那个老师急于放假，加之语言不通，他放假前就没有告诉我，而作为接触实验不到2个月真正的初学者，也没想到要注意抗体，没有去主动问老师。
看来语言太重要，好好学英语，好好学日语！有问题随时问，啥问题想到都问！