查看: 1920  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

qian_me

[交流] 【求助/交流】转染后的Hela S3行免疫荧光后在显微镜下观察,无图像,失败原因探讨。 已有5人参与

我是分子生物实验新手,今天对转染后的Hela S3进行免疫荧光,然后在显微镜下观察,任何细胞的影子都没有,觉得奇怪的地方是,我想不出原因,因为此前进行两次类似的实验都有细胞成像,这次步骤上完全是重复以往的,除了转染的基因不同以外,其他都一样。上周五对细胞进行固定,分别应用4%PFA, 0.5% Triton X-20, 1% Perfect Blocking,进行固定,后存入冰箱冷藏,这周一开始加一抗和二抗,以及核染色。此前做过两次,步骤相同,都获成功,此次失败不知有哪些原因可以导致,请高手们指教!多谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qian_me

呵呵,谢谢这位回帖的朋友~
原因解开了,为了不给初学者带来困扰,我赶紧来自行了断下!
其实是这次质粒TAG不同,所以一抗和二抗不一样,就是说抗体加错了~
都怪带我的那个老师急于放假,加之语言不通,他放假前就没有告诉我,而作为接触实验不到2个月真正的初学者,也没想到要注意抗体,没有去主动问老师。
看来语言太重要,好好学英语,好好学日语!有问题随时问,啥问题想到都问!
4楼2010-08-23 13:41:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

qian_me

补充下,转染的基因对细胞无毒性,转染后细胞生长速度和形态均正常,固定前观察细胞均是正常状态。细胞的密度大概达80%~90%。
2楼2010-08-16 21:34:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sandra2128

金虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你是不是显微镜没调好啊?荧光开关没开吧?
静而后能安;安而后能思;思而后能得。
3楼2010-08-17 07:27:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

henkally

禁虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽

5楼2010-08-23 13:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +3 好运来~9527 2026-10-10 6/300 2026-10-12 14:55 by 简单化xn
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +4 wangyl_123 2026-10-10 7/350 2026-10-12 14:47 by chuans0923
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬,路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费,对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些? +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
请填处理意见