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yxw_1981

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】找不到相应的抗体,Westen Blotting如何做?已有6人参与

如题。
试验材料:一种丝状真菌
试验目的:分离纯化线粒体复合酶III
试验方法:制备线粒体,以Blue-Native非变性电泳分离线粒体膜上的蛋白复合物,Western Blotting鉴定复合酶III条带,回收浓缩复合酶III进行下一步试验。


现在遇到的问题是找不到对应物种复合酶III相应的抗体。痛苦~~~

其他来源,比如人源、牛源或拟南芥的,能否在丝状真菌上应用???
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既然选择前方,只顾风雨兼程!
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linxi8579

铜虫 (正式写手)

yxw_1981(金币+5):多谢! 2010-10-11 11:21:23
引用回帖:
Originally posted by yxw_1981 at 2010-08-02 20:18:54:
如题。
试验材料:一种丝状真菌
试验目的:分离纯化线粒体复合酶III
试验方法:制备线粒体,以Blue-Native非变性电泳分离线粒体膜上的蛋白复合物,Western Blotting鉴定复合酶III条带,回收浓缩复合酶III进行下 ...

我要做免疫共沉淀,也做western.抗体自己制备啊,先把蛋白纯出来,然后打兔子或者让公司做抗体就行了。不过我最近扩基因也是很痛苦,CDNA扩不出来。
2楼2010-08-02 20:35:24
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boying0928

至尊木虫 (著名写手)

yxw_1981(金币+1):多谢! 2010-10-11 11:21:44
对,可以自己制备一下!!!
热爱这里。
3楼2010-08-02 20:46:16
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主

yxw_1981(金币+1):多谢! 2010-10-11 11:21:48
应该很多公司都能过做吧。
如果没有人帮助你,那么你就去帮助别人。
4楼2010-08-02 20:52:14
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henkally

禁虫 (著名写手)

yxw_1981(金币+4):多谢! 2010-10-11 11:21:55
本帖内容被屏蔽

5楼2010-08-03 08:48:09
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yxw_1981 at 2010-08-02 20:18:54:
如题。
试验材料:一种丝状真菌
试验目的:分离纯化线粒体复合酶III
试验方法:制备线粒体,以Blue-Native非变性电泳分离线粒体膜上的蛋白复合物,Western Blotting鉴定复合酶III条带,回收浓缩复合酶III进行下 ...

如果该酶在不同物种之间的同源性很高的话,可以考虑其他物种的抗体试试。
如果你无法检索到该酶的以出售抗体,是可以考虑制作特异抗体,可以使蛋白也可以使多肽。
如果还有问题,可以联系我QQ52187644。
GOOD LUCK!
52187644
6楼2010-08-03 09:15:55
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bunny0512

银虫 (小有名气)

yxw_1981(金币+1):3 2010-10-11 11:22:03
我倒是做过多克隆抗体,时间差不多顺的话两个月做完...蛋白表达纯化打动物取血清测效价得到含多抗的血清..
在哪里~在哪里见过你~
7楼2010-08-03 09:20:31
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xiongpanww

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流,你直接发短消息会更好哦 2012-05-24 13:42:32
引用回帖:
1011188楼: Originally posted by bunny0512 at 2010-08-03 09:20:31:
我倒是做过多克隆抗体,时间差不多顺的话两个月做完...蛋白表达纯化打动物取血清测效价得到含多抗的血清..

bunny0512你好,看到你说两个月就把一抗制备出来了,还检测完其效价,真的很快!我现在也要做细菌的Western blotting 可是苦于没有一抗,如果自己制备的话可能需要很久,而我明年六月就要毕业了,担心时间不够,所以想请教下阁下具体细节,以及如何在这么短的时间内完成的。据我所知,克隆表达重组蛋白,纯化需要一段时间,单单打动物取血清就需要五个星期吧!谢谢啦!如果收到贴,可否留下邮箱,灰常感谢啊!
8楼2012-05-24 10:55:58
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zkyzhanghl

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你好,我想请教一下你的丝状真菌的线粒体是怎么提取出来的呢?
9楼2012-06-29 11:16:54
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