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cocofeifei

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】怎样创建植物组织培养的无菌环境 已有19人参与

刚刚开始研究生阶段的研究,然后老板让做一个完全的方向的研究。植物组织培养是研究的基础,由于本人本科阶段是做化工的,所以没有任何基础。现在想要问各位筒子一个问题,就是无菌环境的创造,我先说一下我知道的哈:
1、培养基培养皿高温蒸汽灭菌。
2、超净台紫外灭菌30min,这时候要把不怕被紫外伤害的所有物品全部放入超净工作台灭菌。
3、把待培养的植物材料外喷75%的酒精后放入超净台,手也要喷酒精才能进入超净台工作。
4、要一直开无菌空气扇。
问题是:如果我的植物材料是用封口膜封上的,那进喷酒精可以杀菌吗?因为封口膜两层塑料之间也会有细菌存在的啊!


还有就是,在配置固体培养基的时候,灭完菌后,要把培养基摇一摇再让其冷却吗?

操作的时候手不允许在任何敞口容器上方经过,但是经过真的很容易染菌吗?

请大家不吝赐教!谢谢!!
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High_Templar

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
903057楼: Originally posted by cocofeifei at 2010-07-29 19:20:34
刚刚开始研究生阶段的研究,然后老板让做一个完全的方向的研究。植物组织培养是研究的基础,由于本人本科阶段是做化工的,所以没有任何基础。现在想要问各位筒子一个问题,就是无菌环境的创造,我先说一下我知道的哈 ...

1、任何手段都只是降低被污染的概率,都无法做到完全无菌,除非一些破坏性的办法,比如高压蒸汽灭菌、灼烧等等,比如超净工作台也只是靠过滤除菌,而这个也不可能做到100%。喷酒精应该叫消毒,而不是灭菌。
2、不需要,除非培养基里添加了一些不溶、易沉淀的东西,比如活性炭。
3、真的,不光是手,任何没有经过灼烧的东西都不能从上经过。无菌的容器打开后,瓶口应横放或者稍朝下,瓶盖也应该底朝下。
23楼2012-10-08 23:59:40
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girlfisher

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-11-26 16:59:45
从第三点看,你的植物组织本身带菌,这样你应该没有任何办法进行无菌实验!!
2楼2010-07-29 19:46:55
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)


silicare(金币+1):谢谢参与 2010-11-26 17:00:04
暴露在空气中生长的材料、物品、手等表面都带菌,记住这一点就行,其他所有无菌操作,自己从头想一遍就知道该如何做了。
3楼2010-07-30 18:31:30
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s_an_mu

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+2):鼓励交流 2010-08-02 17:40:03
不知道你说的植物材料是用封口膜封上的具体是什么状态?另外摇一摇的目的是让不易扩散的物质分散开来。比如,若你在灭菌前琼脂没融化,则灭菌后摇摇防止融化的琼脂沉在底层。若你在灭菌前已确定各种物质分散均匀了,就没必要再摇了。
4楼2010-07-31 12:23:16
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