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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE，丙烯酰胺无法聚合！？
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zylksr

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE，丙烯酰胺无法聚合！？ 已有22人参与

今天做了电泳，灌上分离胶30min后，依然是液体，没有丝毫聚合的意思。请问我问题出在何处了？
丙烯酰胺单体储液（30%）
14.55g丙烯酰胺+0.45g 甲叉

分离胶（10%）配方(10mL凝胶中各成分所需体积)
去离子水                               4.0mL
30%丙烯酰胺一甲叉丙烯酰胺              3.3mL
分离胶缓冲液                           2.5mL
10%SDS                                100微升
10%过硫酸铵(新鲜配制)                  100 微升
TEMED                                 4微升
请赐教～

[ Last edited by zylksr on 2010-7-28 at 12:26 ]
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生活如此美好，引无数英雄竞折腰~
1楼 2010-07-28 12:25:07
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275858014

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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看天(金币+5):鼓励鼓励 2010-07-28 15:20:05
温度会影响胶的凝固的，一般我们都放30度下凝固哈！
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2楼2010-07-28 14:41:02
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muchongllt

银虫 (小有名气)
★ ★
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看天(金币+1):鼓励回答 2010-07-28 15:20:16
过硫酸铵要新鲜配制的！然后TEMED多加点。应该就可以啦
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3楼2010-07-28 15:04:24
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cqyniu

金虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-28 17:12:57
温度也有关系，但是主要应该是你的丙烯酰胺和聚丙烯酰胺的质量不行，换换试试吧。
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4楼2010-07-28 15:27:59
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henkally

禁虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-28 17:13:05
本帖内容被屏蔽
5楼2010-07-28 15:32:57
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tongyanna

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
丙烯酰胺和聚丙烯酰胺的质量问题吧，以前我们用的也是这样换了就好了
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自己的路，自己快乐的走
6楼2010-07-28 19:34:31
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bunny0512

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
ThrisPH值多少？我们上层用6.8  下层8.8
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在哪里~在哪里见过你~
7楼2010-07-28 19:55:51
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hangnan

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
配方是没有错，个人认为SDS-PAGE最关键的是丙烯酰胺,还有就是buffer的pH，分离胶buffer的pH=8.8，浓缩胶的pH=6.8，尽量用好一些的药品吧。AP和TEMED是助凝的吧，是不是你配错了？或者是你的AP已经失效？建议你重新配一次所有buffer，试试看
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8楼2010-07-28 21:57:47
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zylksr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by bunny0512 at 2010-07-28 19:55:51:
ThrisPH值多少？我们上层用6.8  下层8.8

跟你们一样的。可能ph有点误差，但也不至于一点也不聚合吧
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生活如此美好，引无数英雄竞折腰~
9楼2010-07-28 22:25:35
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dcb005

金虫 (著名写手)
★
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应该是AP和TEMED的问题，你AP可能数量级弄错了
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
10楼2010-07-28 22:42:25
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