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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE，丙烯酰胺无法聚合！？
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bunny0512

银虫 (小有名气)
★
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确实,一般不凝的问题就是AP和TEMED的问题...
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在哪里~在哪里见过你~
11楼2010-07-29 09:02:15
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lksweepty

铜虫 (小有名气)
★
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可能是AP和TEMED的问题，你可以换一下新的AP和TEMED试试看：如果是AP不是现配的，更换为现配的试试，假如还不凝，就换成不同批号的试试，假如是可以凝但是很慢，可以加大AP的用量。（我们实验室一般都是AP的问题，好像TEMED很少出问题。）还有，最好能让胶在室温下25度以下凝胶，还有文献称可以在4度过夜凝胶会比较均匀
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12楼2010-07-29 10:58:59
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cnlics

木虫 (小有名气)
★
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凝胶不聚合，基本上是AP的问题。拿瓶新的过硫酸铵，把表面的刮开，称量下面的颗粒。我做过大概几百次PAGE类的电泳，有段时间做等电聚焦，用的是很陈旧的试剂，一天要连续做7,8次。那是什么样的精神和神经阿？

[ Last edited by cnlics on 2010-7-29 at 13:10 ]
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13楼2010-07-29 13:09:55
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zylksr

新虫 (初入文坛)
非常感谢各位的热心！问题解决了！是AP和TEMED的问题。
我把两者比例搞的太高了，而且是AP 的浓度过大。A:T的比应该大概在3:1。 我先前做的过了一夜也聚合了。
不是其他问题。
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生活如此美好，引无数英雄竞折腰~
14楼2010-07-29 14:45:11
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huangfang525

金虫 (小有名气)
★
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TEMED可以多加一点吧，我们这APS一般都是现配的!
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孤单是一个人的狂欢；狂欢是一群人的孤单
15楼2010-07-29 14:59:45
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seahow

木虫 (著名写手)
★
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重新配置丙烯酰胺储存液，，，没问题！！
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16楼2010-07-29 15:12:37
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limian2011

★
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求助！为什么电泳跑的很慢呢，按常规来说，总共六个小时就可以了，为什么我的需要八九个小时呢？我的电流浓缩胶设在20毫安，分离胶是45毫安
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17楼2010-08-04 12:14:32
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
★
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很可能是APS有问题，重新配置。温度高只会凝的快，以现在的气温，肯定不是温度的问题
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18楼2010-08-04 12:16:56
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limian2011

求助：不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳

★
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我的浓缩胶是4%，分离胶是10%，其他的都是按着标准配的，结果跑电泳时间很久，而且染色的时候混在一起，根本分不出来条带，好纠结啊！
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19楼2010-08-04 12:18:12
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195251071

新虫 (初入文坛)
★
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配方没有错，建议检查AP粉剂是不是受潮了。
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20楼2010-08-05 10:36:20
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