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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳 已有13人参与

SDS-PAGE凝胶电泳每一步骤的作用是什么？比如：每隔几小时取出的菌体，离心，沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮（意义？），煮沸（作用？）离心，取上清上样，为什么不取沉淀？为什么悬浮后不直接离心？
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1楼 2010-07-26 18:33:06
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noheartman

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):很好，很详细~~ 2010-07-29 09:25:17
每隔几小时取菌体去做SDS-PAGE凝胶电泳是为了确定目的蛋白的最适合的表达时间，时间太短，母的蛋白表达量少，时间过长，对目的蛋白没好处，所以要确定一个合适的表达时间，蛋白产量不至于太低。SDS-PAGE凝胶电泳中样品室需要和上样缓冲液结合才能电泳的，上样缓冲液里有溴酚蓝可以做指示剂，有SDS和巯基乙醇做变性剂，因为SDS-PAGE凝胶电泳是一个变形的电泳，样品需要彻底的变性，高级结构全部被破坏，煮沸也是为了变性。做蛋白表达，一般都希望的是可溶性的表达，如果以包涵体（目的蛋白表达在沉淀里）就需要进行变性复性，而有些蛋白复性是相当困难的，这也是为什么先取上清去跑胶的原因。收集菌体后，会加入溶菌酶破碎细胞，使目的蛋白释放出来，我们拿缓冲液去悬浮，如果是可溶性表达，目的蛋白至少有一部分是在上清里面。
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16楼2010-07-28 10:18:51
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
呃……我觉得你还是去多想想实验的原理吧……
或者站在细菌的角度考虑，这么干会有什么影响
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2楼2010-07-26 18:50:48
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黄大牛

铜虫 (初入文坛)
虾米意思
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
3楼2010-07-26 19:09:40
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烟大考研

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
ATP说的对……你们是不是想测总的蛋白表达量，连细胞内的也一起算上，如果不是这样的话，你们先悬浮，煮沸后离心，这一步就不太正确
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
4楼2010-07-26 19:15:38
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