应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳
52/1返回列表
查看: 3381  |  回复: 33
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳 已有13人参与

SDS-PAGE凝胶电泳每一步骤的作用是什么？比如：每隔几小时取出的菌体，离心，沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮（意义？），煮沸（作用？）离心，取上清上样，为什么不取沉淀？为什么悬浮后不直接离心？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-07-26 18:33:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黎亚丽

新虫 (小有名气)
★
看天(金币+1):肯能是问题比较稍微简单 所以他们觉得你应该自己去找 呵呵 鼓励一下 常来 2010-07-28 09:37:27
引用回帖:
Originally posted by 花花贝 at 2010-07-26 19:58:02:
每隔几小时 是不是诱导时间长短
蛋白有可能是分泌到细胞外的 就要取上清  也可能在内部 就要裂解
悬浮的缓冲液没什么意义 该怎么加就怎么加
煮沸是不是要变性蛋白质
我也是新手哈哈

[ Last edited by 花 ...

我认为：菌体悬浮于2倍的SDS-PAGE缓冲液（Tric-HCLPH6.7..SDS..甘油。。巯基乙醇），一是使蛋白质变性，一是为了使形成的包涵体可以再折叠，重新溶解。因为包涵体可以溶于缓冲液中。煮沸是变性后的复性过程。

我又一个问题我表达的蛋白会不会在这个过程变性，而不能复性了呢？

有人认为：
菌体需要先用适量的水或者pbs缓冲液重悬，然后加入等体积的2xloading buffer，loadingbuffer中会包含有sds，甘油，指示剂和还原剂，煮沸的作用是使菌体裂解，蛋白与sds，还原剂等充分作用，这样子，蛋白的二级结构，二硫键等都就会被打破，蛋白与sds结合而带负电荷，且带负电荷的比率与蛋白大小的相关，这样蛋白在电泳过程中依照大小而分离达到预想中的分离效果。
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2010-07-27 20:46:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 34 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
呃……我觉得你还是去多想想实验的原理吧……
或者站在细菌的角度考虑，这么干会有什么影响
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-07-26 18:50:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄大牛

铜虫 (初入文坛)
虾米意思
回复此楼
朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
3楼2010-07-26 19:09:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

烟大考研

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
ATP说的对……你们是不是想测总的蛋白表达量，连细胞内的也一起算上，如果不是这样的话，你们先悬浮，煮沸后离心，这一步就不太正确
赞一下(1人) 回复此楼
心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
4楼2010-07-26 19:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 34 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:34 by Xc2FxHsHkBNc
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:17 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 6/300 2026-11-07 15:44 by Xc2FxHsHkBNc
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭