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quinn

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】Sephadex G-100 洗脱问题? 已有5人参与

我在用Sephadex G-100纯化蛋白,洗脱时开始还好,大概上样后5个小时,流速开始下降,用恒流泵加压没有用,反而使胶压紧,胶面下降,并且由于进柱流速增加而出柱的流速不变,使得流动相液面上升,这是为什么,感觉像是哪里堵上了,流速只有10/ml,是不是胶有问题,亲们,有谁知道啊?
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古之成大事者,不惟有超士之才,亦有坚忍不拔之志
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
还是用superdex系列吧
4楼2010-07-23 08:10:03
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cnlics

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-07-23 11:31:31
G-100,75我比较熟悉,G100胶有点软,装柱不能太高,更不能用泵加压,因为胶坍塌了,柱子内部堵死了,如果你停止加压,柱子会恢复一些原体积,但柱子实际上已经不能完全回复了,最好重新、认认真真地装好柱子,下次流速一定不能过高。

如果G75也能用,就用G75,柱子稳定性,装柱高度都比100好。
2楼2010-07-23 07:38:59
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quinn

铁虫 (初入文坛)

谢谢,可是我样已经上了,所以现在只能慢慢过了,1ml/10min,慢慢得我心都碎了!
古之成大事者,不惟有超士之才,亦有坚忍不拔之志
3楼2010-07-23 08:07:20
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quinn

铁虫 (初入文坛)

我刚才去看了一下,更杯具了,柱子下面靠近底部,胶已经开始开了,中间出现好多孔,可是胶面上还是有很多液体的,说明水都下不去了,哎!我可怜的样品,做了好久的。
古之成大事者,不惟有超士之才,亦有坚忍不拔之志
5楼2010-07-23 08:22:31
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