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zzq770204

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】求助:那种方法提取RNA浓度比较高? 已有13人参与

本人拟构建个均一化cDNA文库,需要的RNA量比较多,因此需要比较高的浓度。采用安比奥的试剂盒提取出的RNA浓度太低了,在逆转录和扩增时间的PCR次数太多了,难以满足要求。但是看别人用TRzol抽提由于时间长,很容易降解。请问哪种方法或试剂盒比较好?麻烦指点下,谢谢!

[ Last edited by zzq770204 on 2010-7-29 at 21:18 ]
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mxlo.o

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by super1998 at 2010-07-24 15:37:38:
首先不明白你扩增目的基因后为什么要纯化?扩完了可以直接电泳。
如果反转录可以扩增ACTIN,说明模板质量还行,但是没看到你的RNA,也不知道你的材料来源,因此无法确定能否满足建库的要求。
我给你几个建议,如 ...

我用一种真菌提取出RNA后直接进行了反转录,其中1kb的基因能够扩增出来,但是另外一个基因2kb却扩增不出来,如果扩增出来的算是内参基因的话,是不是我的RNA提取没有问题,那为什么我的2kb的扩增不出来呢
19楼2011-12-09 22:32:50
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zhangzhuang

银虫 (初入文坛)

zzq770204(金币+6): 2010-07-22 14:36:50
你的引物,还有扩增条件的优化
2楼2010-07-21 11:43:11
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won7

金虫 (小有名气)

zzq770204(金币+10): 2010-07-22 14:36:35
“扩增后纯化”是什么意思?是actin扩增后纯化吗?如果是的话,那多半是你的纯化试剂或步骤有问题。clontech构建未剪切文库让公司帮忙,3万元基本可以搞定。
3楼2010-07-21 11:43:53
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sunyongle1

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4):鼓励交流! 2010-07-21 18:08:00
zzq770204(金币+10): 2010-07-22 14:36:11
不见得是RNA的问题,RNA只要降解不是很厉害,就能满足普通的反转录,扩个Actin还是没有问题的。但是如果要建库,就要保证RNA的质量和反转录的质量。
你们实验室不缺钱的话,还是交给公司吧。也就两三万,自己做很费劲,质量也很难保证。
4楼2010-07-21 14:57:54
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