24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 760  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zephyr0911

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于相对定量的重复板数据处理 已有3人参与

各位好!

最近我在做的实验是这样的,一共做10个基因。每个板上做3个(包括一个参照,实际是两个)。我发现同样的基因在不同板上跑出来的结果很不一样,包括有两个连趋势都不一样,有些是表达量差异很大,几十倍的差异。请问我最后想要把这些所有基因整合到一张图上去,这些不同板上重复的数据我怎么处理呢?还有这种板之间的差异正常吗?

PS 我用的SYBR染料,ROCHE LIGHT机子。

谢谢大家了!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
板之间要加入一个标准来扣除每次的误差哦
我是把cDNA分装成一次用量的小份放在-80保存,每次拿一管出来扩3孔内参,当标准品来使

另外做实时定量一定要用进口的枪头,用同一套枪,最好同一个人混样,每次点样的位置都一样,这样误差就能减小不少

还有就是复孔之间的标准差有多大呢?如果是因为标准差大导致均数差异大那么其实还是个均一性的问题
4楼2010-07-20 10:44:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果同一基因在不同板上差距在几十倍是不正常的,按理来说板之间不应该有这么大的差距。3~5倍都是有可能的,但几十倍过大了
建议重新做实验来确认数据。毕竟连你自己都觉得有问题的数据,还是谨慎处理为好。
你的PCR条件是否是优化过的,而且用sybr时,你的melting curve质量如何?
2楼2010-07-20 10:31:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zephyr0911

新虫 (小有名气)

谢谢您的回答!溶解曲线很好,您所说的PCR条件优化具体指的是什么?望赐教!

还有像板之间的差异最后整合成一个图的时候数据具体怎么处理,是选择自己觉得好的?还是取个平均值啥的?
3楼2010-07-20 10:37:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zephyr0911

新虫 (小有名气)

谢谢您的回答。还有个问题,就是如果我们要将相对表达量差异很多的基因做到一个图上。如GeneA 表达范围是0.1-1.0,而GeneB表达范围是100-500,那通过什么软件做比较好?做到既美观又直观呢?

谢谢!
5楼2010-07-20 13:27:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程085601,270求调剂 +35 @ASDF1234 2026-04-08 37/1850 2026-04-13 01:18 by 幸免 ..
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+4 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 18/900 2026-04-13 01:17 by 幸免 ..
[考研] 310求调剂 +13 666真好 2026-04-11 14/700 2026-04-12 16:48 by 1005715100
[考研] 277 数一104,学硕,求调剂 +21 瓶子PZ 2026-04-09 23/1150 2026-04-11 23:12 by labixiaoqiao
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 0854调剂 +5 音像店听花鼓戏 2026-04-10 5/250 2026-04-11 10:49 by qingpingzhu
[考研] 346,工科求调剂 +3 moser233 2026-04-09 3/150 2026-04-11 10:04 by zhq0425
[考研] 311求调剂 +13 xyp想读书 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:41 by 猪会飞
[考研] 284求调剂 +19 梵@@ 2026-04-06 21/1050 2026-04-10 21:12 by zhouxiaoyu
[考研] 287求调剂 +15 Fnhc 2026-04-07 21/1050 2026-04-10 19:09 by chemisry
[考研] 材料专业344求调剂 +16 hualkop 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 17:28 by laoshidan
[考研] 282,电气工程专业,求调剂,不挑专业 +9 jggshjkkm 2026-04-10 9/450 2026-04-10 14:55 by 逆水乘风
[基金申请] 有爆料,一个青年教师卖房得400万,然后换了一个四青帽子 +9 babu2015 2026-04-08 9/450 2026-04-10 11:43 by 苏东坡二世
[考研] 一志愿华工085600 331分 +6 天下ww 2026-04-09 6/300 2026-04-09 18:59 by l_paradox
[考研] 材料工程调剂 +12 小刘同学吖吖 2026-04-06 13/650 2026-04-09 17:07 by luoyongfeng
[考研] 材料与化工专硕306分找合适调剂 +27 沧海轻舟e 2026-04-06 28/1400 2026-04-08 22:06 by wdyheheeh
[考研] 生物医药调剂|SCI中科院三区一作+多项科研成果 +8 likangxing 2026-04-07 11/550 2026-04-08 00:02 by lys0704
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 287分求调剂 有专利国奖一志愿哈工大085406 +6 白易辰 2026-04-06 7/350 2026-04-06 22:46 by 875465
[考研] 307求调剂 +3 所念及所望 2026-04-06 3/150 2026-04-06 17:30 by 土木硕士招生
信息提示
请填处理意见