24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 758  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zephyr0911

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于相对定量的重复板数据处理 已有3人参与

各位好!

最近我在做的实验是这样的,一共做10个基因。每个板上做3个(包括一个参照,实际是两个)。我发现同样的基因在不同板上跑出来的结果很不一样,包括有两个连趋势都不一样,有些是表达量差异很大,几十倍的差异。请问我最后想要把这些所有基因整合到一张图上去,这些不同板上重复的数据我怎么处理呢?还有这种板之间的差异正常吗?

PS 我用的SYBR染料,ROCHE LIGHT机子。

谢谢大家了!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
板之间要加入一个标准来扣除每次的误差哦
我是把cDNA分装成一次用量的小份放在-80保存,每次拿一管出来扩3孔内参,当标准品来使

另外做实时定量一定要用进口的枪头,用同一套枪,最好同一个人混样,每次点样的位置都一样,这样误差就能减小不少

还有就是复孔之间的标准差有多大呢?如果是因为标准差大导致均数差异大那么其实还是个均一性的问题
4楼2010-07-20 10:44:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果同一基因在不同板上差距在几十倍是不正常的,按理来说板之间不应该有这么大的差距。3~5倍都是有可能的,但几十倍过大了
建议重新做实验来确认数据。毕竟连你自己都觉得有问题的数据,还是谨慎处理为好。
你的PCR条件是否是优化过的,而且用sybr时,你的melting curve质量如何?
2楼2010-07-20 10:31:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zephyr0911

新虫 (小有名气)

谢谢您的回答!溶解曲线很好,您所说的PCR条件优化具体指的是什么?望赐教!

还有像板之间的差异最后整合成一个图的时候数据具体怎么处理,是选择自己觉得好的?还是取个平均值啥的?
3楼2010-07-20 10:37:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zephyr0911

新虫 (小有名气)

谢谢您的回答。还有个问题,就是如果我们要将相对表达量差异很多的基因做到一个图上。如GeneA 表达范围是0.1-1.0,而GeneB表达范围是100-500,那通过什么软件做比较好?做到既美观又直观呢?

谢谢!
5楼2010-07-20 13:27:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290调剂生物0860 +28 哇哈哈,。 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 01:16 by 幸免 ..
[考研] 322求调剂,08工科 +4 今天是个小号 2026-04-08 4/200 2026-04-13 00:20 by baobaoye
[考研] 297工科,求调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-12 10/500 2026-04-12 22:44 by lbsjt
[考研] 一志愿085502,267分求调剂 +14 再忙也要吃饭啊 2026-04-08 15/750 2026-04-12 22:33 by fqwang
[考研] 2本,初试303,0860求调剂 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
[考研] 085600材料与化工,求调剂 +12 won_qii 2026-04-07 12/600 2026-04-12 17:02 by lhj2009
[考研] 335求调剂 +13 想上岸呀!! 2026-04-12 13/650 2026-04-12 11:37 by 柴小白
[找工作] 山东高校教师考核超级无底线,员工过不下去啦 +4 qut2026 2026-04-09 9/450 2026-04-12 00:54 by qut2026
[考研] 280求调剂 +13 wzzz王 2026-04-09 13/650 2026-04-12 00:31 by 勇攀高峰0126
[硕博家园] 有没有学校材料专业收跨调(一志愿085410) +6 momo(上岸版) 2026-04-06 9/450 2026-04-11 22:38 by wj165256
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[论文投稿] mdpi小修rvr时间四五天了 20+3 哈哈high 2026-04-08 5/250 2026-04-10 16:02 by 北京莱茵润色
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 材料科学与工程320求调剂,080500 +12 黄瓜味薯片 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:26 by luoyongfeng
[考研] 307求调剂 +14 超级伊昂大王 2026-04-06 14/700 2026-04-08 07:03 by 无际的草原
[考研] 307求调剂 +3 Youth@@ 2026-04-07 3/150 2026-04-07 22:00 by hemengdong
[考研] 071000生物学,一志愿深圳大学296分,求调剂 +12 TIckLw 2026-04-06 13/650 2026-04-07 20:34 by lijunpoly
信息提示
请填处理意见