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songzi1030

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【讨论】直接滴定法测多糖已有10人参与

有人用直接滴定法测多糖含量么？
是不是测之前要先吧多糖完全水解，但是查了好多文献，都说只是部分水解，有没有能完全水解多糖的方法？
不知道不完全水解的话，能不能直接测多糖含量？
希望各位同学能够帮忙

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1楼2010-07-05 23:56:39

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lwb1987521

木虫 (正式写手)

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粗多糖测定
多糖的测定方法，目前有碱性酒石酸铜滴定法、比色法（蒽酮比色法、硫酸-苯酚法）。一般说来，比色法的优点是灵敏度高，达到µg/ml（滴定法一般为mg/ml），样品用量少；但缺点是一般做常规检测时使用葡萄糖作标准品，误差较大，应以被测物的纯品作对照品，以求出换算因子，但要制备被测物的纯品并非每个实验室所能做到的，而且保健食品中往往是多种中草药的提取物作为原料而制成，所含多糖是不同相对分子量多糖的混合体，这就给提取纯品增加了难度。所以当成品中多糖含量大于1%（质量浓度）时，最好选用碱性酒石酸铜滴定。
滴定法
1.样品预处理
取本品适量，精密称定，置于250ml磨口烧瓶中，精密加水50ml，称定重量，置沸水浴回流2小时，放置至室温，用水补足减失重量，混匀，滤过，精密吸取续滤液15ml于100ml离心管中，加无水乙醇75ml，混匀，以4000r/min离心10min，并小心弃去上清液,再加15ml热水(温度＞90℃)冲洗离心管中沉淀物,重复一次后再以4000r/min离心30min，弃去上清液，沉淀用乙醇液（水：乙醇=15：75）洗涤两次，离心，弃去洗涤液。
2.样品水解
将离心管中醇析物用50ml热水（温度＞90℃)少量多次转移至250ml磨口三角瓶中，加入15ml浓盐酸，开启冷凝管，在沸水浴中回流2h，冷却，先用40％的氢氧化钠（约15ml）粗调Ph值，后用稀的氢氧化钠溶液细调，再置于PH计上调整pH在6.8～7.2之间。将中和的酸解液移置至100ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀,过滤，滤液供滴定用。
3.碱性酒石酸钾钠铜溶液标定
3.1精密吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5ml于150ml的锥形瓶中，加10ml蒸馏水及2粒玻璃珠，用滴定管加入9.0ml葡萄糖标准溶液于锥形瓶中。
3.2将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2分钟内至沸，并保持溶液在微沸状态下再用标准葡萄糖溶液滴定，以每2秒1滴的速度滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。同法平行操作三份，取其平均值（V1）。
3.3样品溶液预测和测定。
3.3.1 样品溶液的预测
精密吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5ml于150ml的锥形瓶中，精密加入10ml蒸馏水及2粒玻璃珠，控制在2分钟内加热至沸，保持溶液在微沸状态下以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品水解液液进行滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录葡萄糖标准溶液消耗体积。
3.3.2样品溶液的测定
精密吸取碱性酒石酸铜甲液与乙液各5.0ml，置于150ml锥形瓶中，精密加入蒸馏水10ml及玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1ml的样品水解液，将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2分钟内至沸，并保持溶液在微沸状态下再用样品水解液滴定，以每2秒1滴的速度滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。同法平行操作三份，得出平均消耗体积（V2）。
最后计算结果乘以0.9，此为葡萄糖换算成粗多糖的细数。

我比较过这三种方法：滴定法和硫酸-苯酚法重复性都还可以，关键是试验操作人员要充分理解试验步骤，注意细节。滴定法主要就是离心、洗涤、滴定。硫酸-苯酚法如果也是采用醇沉得到多糖，操作步骤也是注意离心、和洗涤除去单糖；如果是用碱性二价铜试剂选择性地从高分子中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸法测定，需要注意的事项：在沉淀葡聚糖时尽量使被沉淀液里粗多糖的含量高些，然后在测定环节再稀释回适合浓度，这样可减少损失带来的误差，便于得到好的重复性；还有就是这一环节好多国标或文献给出的离心参数是3000转/分钟离心5分钟，试验过程中发现这个参数不合理，离心下来的沉淀在倾出上清液时会丢失，这也是好多试验人员说这个方法重复性不好的原因之一，参数应为4000转/分钟离心15分钟。蒽酮比色法不适合保健食品中多糖测定，应为这种方法需要测定液必须清澈透明，加热后不应该有沉淀；还有测定过程中所用蒽酮试剂中硫酸的浓度、取样液量、蒽酮试剂用量、沸水浴中反应时间，这几个操作条件的控制对试验结果影响很大，而且这几个条件之间是有联系的。不适合大生产检验。

以上资料均源自http://bbs.foodmate.net/viewthre ... p;extra=&page=2请参考