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【讨论】直接滴定法测多糖 已有10人参与
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有人用直接滴定法测多糖含量么？ 是不是测之前要先吧多糖完全水解，但是查了好多文献，都说只是部分水解，有没有能完全水解多糖的方法？ 不知道不完全水解的话，能不能直接测多糖含量？ 希望各位同学能够帮忙 |
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lwb1987521
木虫 (正式写手)
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多糖含量测定 关于多糖含量测定，业内有两种评价方法。一种是狭义上严格的多糖测定，即水提取多糖后，以凝胶色谱柱分离、洗脱提纯粗多糖得到较单一分子量的多糖，再水解成各种单糖，以HPLC法分离测定各单糖，即可得到比较严格意义上的多糖含量及其组成。这种方法是科研级的多糖测定。 另一种评价方法一般是生产企业用于质控的多糖测定：一般过程是水提醇沉粗多糖后，以葡萄糖作为相比较的物质，加入特定显色剂后比色测定粗多糖的含量。注意，这种方法测得的是以葡萄糖作为折算的多糖含量。但这种评价方法简单实用，能反映一定的质量指标，作为质控之用可以的了。包括中国药典和一些国标、行标都采用此方法评价多糖含量，方法大同小异，如硫酸-苯酚法，硫酸-蒽酮法。但根据不少实际检验人的反映，要想检测结果有很好的重现性，还是有很多细节问题要注意的。 以下是本人亲自做过的方法过程，觉得重现性和准确性都不错的。因为不同的检验室检验工具不太一样，大家可以实事求是作变通。但要充分认识本检验方法的原理，过程要避免干扰哦。可以找本《中药化学》看看。 中药总多糖含量测定（苯酚-硫酸比色法） 供试品溶液的制备：①提取上清液：精密称取样品细粉2.2g（约相当于多糖0.22g），置烧瓶中，加水100ml置电炉上加热回流提取1.5h，放冷至室温，3000～4000rpm离心10min，收集上清液，用少量水分次洗涤烧瓶及离心管，同样离心收集上清液。 ②提取多糖沉淀：合并全部上清液置蒸发皿中，置电炉上小心加热（避免焦化）浓缩到约15ml，放冷至室温，加乙醇100ml，搅匀，放置使其沉淀15分钟。转移此溶液连同沉淀于离心管中，继续用少量80%乙醇以玻棒充分刮洗蒸发皿，洗液和沉淀同样转移至离心管中，以3000～4000rpm速度离心15min，弃去上清液，在离心管中加入少量80%乙醇，轻轻洗涤，同样离心弃去上清液（保留沉淀物）。 然后将离心管（连同沉淀物）于50℃烘箱挥干乙醇（不能见到任何液体），然后加热水溶解沉淀，转移至250ml量瓶中，继续用热水以玻棒充分刮洗离心管，洗液同样转移至250ml量瓶中，放冷至室温，用水定容至刻度，摇匀，精密量取5ml置100ml量瓶中，用水定容至刻度，摇匀即得供试品溶液。 标准曲线的制作：精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖适量，加水配制成0.85mg/ml的贮备液。精密吸取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml分别置于50ml量瓶中加水定容至刻度，摇匀得葡萄糖稀释液。再分别精密量取上述各稀释液2 ml置具塞试管中，同时精密量取水2.0 ml置另一具塞试管中，各管分别加5%苯酚溶液（新制）1 ml，摇匀，然后迅速加入浓硫酸5.0ml，立即摇匀，于40℃水浴中保温30min，取出，置冰水浴中5 min。以上述2.0ml水所制得的空白溶液做参比，于489nm波长处测定各溶液吸收度，以葡萄糖稀释液的浓度（μg/ml）为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。备注：在准确度要求不很高时，可用对照品一点法代替标准曲线，即对照品只做一个点（精密取5.0ml葡萄糖贮备液稀释至100ml得葡萄糖稀释液，然后进行苯酚-硫酸反应，测定吸收度）。 样品测定：取供试品溶液2.0ml置具塞试管中，按“标准曲线的制作”项下同法加苯酚溶液和浓硫酸，测定吸收度。根据样品吸收度从标准曲线上读取葡萄糖浓度，再计算出样品中总多糖的含量（以葡萄糖计）。备注：如果采用对照品一点法，则根据吸收度比值计算样品中总多糖的含量。 |
15楼2010-09-07 09:01:54
柳飞绵
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2楼2010-07-06 09:35:15
yangguang200316
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天冬酰胺
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