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xiaoru2010

[交流] 【求助/交流】克隆连接时间 已有11人参与

问一下大家做克隆的时候,一般多少度连接多长时间啊?我用的是PMD19-T载体,上次16度连了23小时,有个1000多的片段还是没连上,菌液PCR出现好多条带……PS:貌似PGEM-T载体25度时间长了什么也连不上
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zemin_fang

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):热心虫友。 2010-06-23 16:11:58
16°连接2个小时就够了,主要是载体与外源片段的比例要合适,我做连接的体系是载体0.5ul,加入外源DNA与载体比例为1:5——1:10,连接buffer5ul,用水补到10ul。
还有一点是要确保你的外源片段加入了A
11楼2010-06-23 15:07:20
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walker2898

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我做的连接一般是在4度和16度连接12小时,但是不是用你说的这个载体。
2楼2010-06-23 11:19:57
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wywangying169

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-23 12:35:52

以前做克隆的时候,用的载体是PMD18,一般是4度连接过夜,也就是大概14个小时左右。现在在用一个试剂盒,载体是PEASY-T3,只要连接五分钟就可以了!

[ Last edited by wywangying169 on 2010-6-23 at 14:54 ]
好好自学,好好工作
3楼2010-06-23 11:29:22
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xiaoru2010

引用回帖:
Originally posted by wywangying169 at 2010-06-23 11:29:22:

以前做克隆的时候,用的载体是PMD18,一般是16度连接过夜,也就是大概14个小时左右。现在在用一个试剂盒,载体是PEAY-T3,只要连接五分钟就可以了!

好强的载体?单卖多少钱a?
4楼2010-06-23 11:37:36
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