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求学无止境木虫 (正式写手)
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【求助】肉桂酸-4-羟化酶测定方法 已有6人参与
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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| 参照Lamb 和Rubery等的方法。准确称取鲜样0.2g,冰浴研磨后加入3ml提取液（50 mmol/L Tris-HCl:pH8.9,15mmol/Lβ-巯基乙醇，4 mmol/L MgCl2,5mmol/L Vc,10μmol/L Leupeptin,1 mmol/L PMSF,0.15%:m/V PVP,10%甘油，混匀后超声波破碎2 min,四层纱布过滤后，在4℃下以12000r./min 离心20min .取上清液为C4H粗酶提取液。酶反应液组成为：0.8ml 酶提取液，2.2ml缓冲液（2μmol/L 反式肉桂酸，50 mmol/L Tris-HCl: pH8.9, 2μmol/L NADPNa2,5μmol/L G6-PNa2）.25℃下振荡30分钟后，加入100μL 6mol/L HCl终止反应，以12000r./min 离心10min，取上清液在340 nm处比色。参比为不加酶提取液（加入0.8 mL ddH2O）.酶活性表示为：U/(mg.h) |
2楼2011-02-28 13:19:56