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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 【求助】肉桂酸-4-羟化酶测定方法
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求学无止境

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】肉桂酸-4-羟化酶测定方法 已有6人参与

请各位高人传授肉桂酸-4-羟化酶（C4H）的光度测定方法，谢谢
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努力、努力、不断地努力
1楼 2010-06-12 21:16:05
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fu108042

木虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
参照Lamb 和Rubery等的方法。准确称取鲜样0.2g,冰浴研磨后加入3ml提取液（50 mmol/L Tris-HCl:pH8.9,15mmol/Lβ-巯基乙醇，4 mmol/L MgCl2,5mmol/L Vc,10μmol/L Leupeptin,1 mmol/L PMSF,0.15%:m/V PVP,10%甘油，混匀后超声波破碎2 min,四层纱布过滤后，在4℃下以12000r./min 离心20min .取上清液为C4H粗酶提取液。酶反应液组成为：0.8ml 酶提取液，2.2ml缓冲液（2μmol/L 反式肉桂酸，50 mmol/L Tris-HCl: pH8.9, 2μmol/L NADPNa2,5μmol/L G6-PNa2）.25℃下振荡30分钟后，加入100μL 6mol/L HCl终止反应，以12000r./min 离心10min，取上清液在340 nm处比色。参比为不加酶提取液（加入0.8 mL ddH2O）.酶活性表示为：U/(mg.h)
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2楼2011-02-28 13:19:56
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烟尽花落

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
计算公式呢~
求详细的测定方法~
拜托了~
急急急！
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3楼2011-10-11 23:30:34
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求学无止境

木虫 (正式写手)
酶活以每小时内OD340变化0.01为1个活性单位，酶活性表示为：U/h/mg protein。它的酶活性测定为动力学测定方法，用一段时间的吸光度值得差值除以时间和样品中蛋白含量的乘积
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努力、努力、不断地努力
4楼2011-10-20 14:45:22
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pd1987

新虫 (初入文坛)
我也在测
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5楼2012-02-15 23:12:47
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王曼莹

银虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by fu108042 at 2011-02-28 13:19:56
参照Lamb 和Rubery等的方法。准确称取鲜样0.2g,冰浴研磨后加入3ml提取液（50 mmol/L Tris-HCl:pH8.9,15mmol/Lβ-巯基乙醇，4 mmol/L MgCl2,5mmol/L Vc,10μmol/L Leupeptin,1 mmol/L PMSF,0.15%:m/V PVP,10%甘油，混 ...

请问G6-PNa2是什么呀？
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Tomorrow is another day.
6楼2013-11-12 22:16:58
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王曼莹

银虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by 烟尽花落 at 2011-10-11 23:30:34
计算公式呢~
求详细的测定方法~
拜托了~
急急急！

请问G6-PNa2是什么呀？
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Tomorrow is another day.
7楼2013-11-12 22:18:25
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蓝苑1988

银虫 (小有名气)
★
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7楼: Originally posted by 王曼莹 at 2013-11-12 22:18:25
请问G6-PNa2是什么呀？...

D-葡萄糖-6-磷酸二钠盐
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石头
8楼2013-12-18 10:13:42
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王曼莹

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 蓝苑1988 at 2013-12-18 10:13:42
D-葡萄糖-6-磷酸二钠盐...

9楼2013-12-20 17:00:35
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LIVESOCCER

金虫 (正式写手)
★
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4楼: Originally posted by 求学无止境 at 2011-10-20 14:45:22
酶活以每小时内OD340变化0.01为1个活性单位，酶活性表示为：U/h/mg protein。它的酶活性测定为动力学测定方法，用一段时间的吸光度值得差值除以时间和样品中蛋白含量的乘积

你好！文献上没说结算一段时间内的差值啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2014-03-07 15:13:00
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