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xjx11228

木虫 (正式写手)

[交流] 如何求酶促反应中最大反应速度？单位是什么？

问题：对于一个酶促反应，通常由米氏方程求米氏常数和最大反应速度以及催化反转常数，可是有关数据只是底物一系列浓度及所对应的吸光度值，请问如何求出米氏常数？尤其是这个最大反应速度的单位不好确定？ 我是不是还缺少条件？文献都是10^-8 M s^-1,这个如何得出？谢谢各位了。

[ Last edited by xjx11228 on 2010-6-9 at 16:34 ]
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1楼 2010-06-09 15:04:32
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xiangyu2888

金虫 (正式写手)
xjx11228(金币+3): 2010-06-13 12:38:19
补充一点，你只需要测定一条标准曲线（一系列浓度的产物浓度和吸光值的关系）A=a+bY
然后根据你举的例子中的吸光值计算出对应的一系列产物浓度，即可得到：
TMB浓度   产物浓度
1                   Y1
2                   Y2
……
如果你以TMB为底物的时间够短的话（设为t），则你需要求算米氏常数的反应初速度为Y/t,  单位mol/(L.s)，对应不同的底物浓度，就对应有一定的反应初速度，则：
TMB              R
1                  r1
2                  r2
……
再往下你就会了吧
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天天向上！！
6楼2010-06-13 10:07:25
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xiangyu2888

金虫 (正式写手)
xjx11228(金币+3, 博学EPI+1): 2010-06-12 19:22:24
你的吸光度值【A】不能直接用作求算最大反应速度的参数，而是应该转换成产物浓度【Y】mol/L（这一步用标准曲线就可以得出），通过短时间t内的产物浓度的变化求出初反应速度r0,(mol/L.s)。假设你的底物浓度为【S】，则将底物浓度的倒数1/[S]作为横坐标，将反应初速度的倒数1/r0作为纵坐标作图，做出来的图上面就有最大反应速度和米氏常数这类的参数了，单位就是mol/(L.s)
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天天向上！！
2楼2010-06-11 09:37:53
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xjx11228

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xiangyu2888 at 2010-06-11 09:37:53:
你的吸光度值【A】不能直接用作求算最大反应速度的参数，而是应该转换成产物浓度【Y】mol/L（这一步用标准曲线就可以得出），通过短时间t内的产物浓度的变化求出初反应速度r0,(mol/L.s)。假设你的底物浓度为【S】 ...

非常谢谢你的回答。方法是对的。可是有一点还不明白。由A转换为浓度时由标准曲线来计算产物浓度。关键是这个产物浓度的标准曲线如何制得？还是用同一组数据?
如HRP对TMB底物的米氏常数和最大反应速度：
TMB浓度    Absorbance
1                       0.034
2                       .....
3                       .....
4
5
6
产物的浓度如何得到？测得A是底物氧化后产物的，是否由化学反应方程式得出。这样一来吸光度数值就没有用了。
是否有其它转换方法呢？用吸光度肯定不对，否则计算单位不对。
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3楼2010-06-12 19:20:41
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xjx11228

木虫 (正式写手)
求助中。。。。。。。。。
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4楼2010-06-13 09:55:07
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