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cloudy3197

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[交流] 【求助/交流】生物学科科普贴，有啥说啥，欢迎参与～～已有1人参与

虽说是“术业有专攻”，但咱们还是应该知道些其他相关的东西，是吧？所以这个帖子不用说太难的东西，有什么不懂的也可以提问，解答的口语些也没关系，科普么，各位知道什么的也说说哈～～～

我先提问：什么叫“病毒包装”？？

还有，PCR时候，既然酶在好几十度都有活性，为什么还要等到最后加？是怕酶失活么？

[ Last edited by cloudy3197 on 2010-6-8 at 15:50 ]

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1楼 2010-06-08 15:47:21

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ben1147

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scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-06-08 22:51:36

PCR的时候加Taq酶的时候主要是考虑到这几个方面

一是在室温下，Taq酶也有一定的活性，这时候就相当于一个非常低退火温度的反应体系。大家都知道低的退火温度有利于错配形成，而且开始阶段的错误会在后续反应过程中被放大，严重干扰产物的特异性。所以Taq酶要最后加，并且一直要保持低温，直接开始正常反应，防止这种错配出现。

其次是如果先加酶，加入的时候不能保证体系中盐离子浓度是1X，有可能导致酶失活
比如，先加buffer，再加酶，后加水的话，加酶的时候，体系里面盐离子浓度远远超过1X，影响酶活。又如果先加水，后加酶，再加buffer的话，体系里面基本没有盐离子，酶也是不稳定的。其他情况也类似，过高的引物或模板或dNTP浓度都会导致副反应的发生。所以要先加好其他成分，建立起接近1X的反应环境，最后再加酶

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