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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】总RNA提取中RNase的处理问题
汕头大学海洋科学接受调剂
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dongfangzz

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】总RNA提取中RNase的处理问题 已有5人参与

总RNA提取所用的试剂盒中有没有RNase抑制剂呀？
如果没有，那其中的RNase的处理是否是必须的步骤？

[ Last edited by dongfangzz on 2010-6-8 at 12:13 ]
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1楼 2010-06-07 16:36:02
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-08 06:16:31
提总RNA怎么会用RNase处理？

提取过程中一般没有RNase抑制剂，因为提取过程中涉及到酚、氯仿等蛋白变性剂，而常用的RNase抑制剂（比如RNasin）是蛋白，一样变性失活。氧钒糖核苷复合物之类的也许可以用

反转录的时候会用RNasin
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2楼2010-06-07 23:39:30
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ququr008

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-08 22:45:32
引用回帖:
Originally posted by dongfangzz at 2010-06-07 16:36:02:
总RNA提取所用的试剂盒中有没有RNA抑制剂呀？
如果没有，那其中的RNase的处理是否是必须的步骤？

提取RNA的原理就是要除去DNA和蛋白以及其他的一些无关成分，RNase抑制剂当然是不需要的。另外，一般如果提取量比较大，而且提取出来马上用的话，一般不加抑制剂也是可以的额！但是在操作过程中所用的耗材则必须处理好，不要外带入RNase，否则RNA质量肯定不好。
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3楼2010-06-08 10:14:53
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dongfangzz

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-07 23:39:30:

反转录的时候会用RNasin  ...

反转录时必须要用RNase抑制剂吗？比如RNasin ？
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4楼2010-06-08 12:12:12
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by dongfangzz at 2010-06-08 12:12:12:


反转录时必须要用RNase抑制剂吗？比如RNasin ？

不必须，但是推荐用，能保证较大概率获得比较完整，甚至全长的cDNA。
尤其是要求有末端序列的时候，最好还是加一点
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5楼2010-06-08 12:14:54
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lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
★
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又学到东西了
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6楼2010-07-05 21:22:47
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xiaoru2010

★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-06 09:18:45
提取完后一定要进行DNA消化，这步就要加入RNAsin。
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7楼2010-07-06 09:16:09
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