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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒提取后酶切不动
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donghuayang

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒提取后酶切不动 已有10人参与

我提取的质粒按照正规操作完成，可就是酶切不完全，即使是48小时以后也不能完全酶切，请问谁知道会是什么原因呢？谢谢
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读万卷书，不如行万里路；行万里路，不如阅人无数。
1楼 2010-05-22 23:07:55
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donghuayang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by mourning at 2010-05-24 21:46:16:
质粒鉴定过吗？设计个引物看看

谢谢，这都是测序后重新转化提取的质粒，应该是没有问题的。
赞一下 回复此楼
读万卷书，不如行万里路；行万里路，不如阅人无数。
11楼2010-05-25 10:01:11
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-24 22:54:25
酶切其实受的影响因素挺多的，加大酶的使用量或者改善一下缓冲液的体系。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-05-22 23:12:03
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sushang

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-24 22:54:32
需要注意一些细节：比如，先加DNA， 后加缓冲溶液，再加酶；
温度是否是酶切的最适温度等；
再者 酶是否可以内切你的质粒？
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-05-23 00:06:34
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
donghuayang(金币+1):是的，我也出现过从一个菌株提取出来的质粒转化到另外的菌种里边去后提取出的质粒不正常 2010-05-23 13:06:47
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-24 22:54:40
可能的原因：
使用了非克隆菌株。DNA发生甲基化等修饰
使用了不常用的酶，如SacII，这种酶因未知的原因对某些本应是别的序列确实切不开。
酶的活性有问题。是不是加多了（甘油太多会影响活性），或是酶本身有问题。使用NEB的酶切一下试试。
赞一下(2人) 回复此楼
生命的海洋里，我是蓝色的一滴
4楼2010-05-23 01:32:13
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