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韩丽丽

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[交流] 【求助/交流】Nru1 这个酶怎么这么难用！已有2人参与

用1微升十个单位的酶切5微克的质粒切了7小时了还切不全，真崩溃啊，大家也是这样吗？或者Fermentas的酶真的不如TAKARA的好用？

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1楼 2010-05-20 19:08:43

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韩丽丽

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可以切开，但是切不全

7楼2010-05-20 23:14:08

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查看全部 7 个回答

gastrodia

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你用的是Fastdigest的内切酶，如果甲基化的方式是CpG: 完全重叠 – 阻止酶切。5微克的质粒用1微升有点少啊，应该用5微升才好啊

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2楼2010-05-20 19:28:25

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韩丽丽

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引用回帖:

Originally posted by 韩丽丽 at 2010-05-20 19:08:43:
用1微升十个单位的酶切5微克的质粒切了7小时了还切不全，真崩溃啊，大家也是这样吗？或者Fermentas的酶真的不如TAKARA的好用？

不会吧，用1微升已经是两倍的量了，用5微升？我从来没这样做过，为什么用这么多？

3楼2010-05-20 20:59:58

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韩丽丽

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不好意思，还想问下这个CPG完全重叠阻止酶切这个怎么理解？Nru1的识别序列就是TCGCGA呀，那这个酶就不能用？

4楼2010-05-20 21:06:30

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