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韩丽丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】Nru1 这个酶怎么这么难用！ 已有2人参与

用1微升十个单位的酶切5微克的质粒切了7小时了还切不全，真崩溃啊，大家也是这样吗？或者Fermentas的酶真的不如TAKARA的好用？
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1楼 2010-05-20 19:08:43
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-20 20:05:54
lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-05-20 21:36:12
你用的是Fastdigest的内切酶，如果甲基化的方式是CpG: 完全重叠 – 阻止酶切。5微克的质粒用1微升有点少啊，应该用5微升才好啊
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2楼2010-05-20 19:28:25
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韩丽丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 韩丽丽 at 2010-05-20 19:08:43:
用1微升十个单位的酶切5微克的质粒切了7小时了还切不全，真崩溃啊，大家也是这样吗？或者Fermentas的酶真的不如TAKARA的好用？

不会吧，用1微升已经是两倍的量了，用5微升？我从来没这样做过，为什么用这么多？
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3楼2010-05-20 20:59:58
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韩丽丽

新虫 (小有名气)
不好意思，还想问下这个CPG完全重叠阻止酶切这个怎么理解？Nru1的识别序列就是TCGCGA呀，那这个酶就不能用？
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4楼2010-05-20 21:06:30
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韩丽丽

新虫 (小有名气)
还有，就是想问一下，如果 我用5微升切多久就可以完全切开？
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5楼2010-05-20 21:10:30
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
CPG是甲基化的一种形式，切多久，如果甲基化了，你切时间再长也不可能完全切开，如果实在切不开建议换一种感受态，重新提质粒进行酶切，
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6楼2010-05-20 21:37:02
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韩丽丽

新虫 (小有名气)
可以切开，但是切不全
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7楼2010-05-20 23:14:08
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