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韩丽丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】Nru1 这个酶怎么这么难用! 已有2人参与

用1微升十个单位的酶切5微克的质粒切了7小时了还切不全,真崩溃啊,大家也是这样吗?或者Fermentas的酶真的不如TAKARA的好用?
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gastrodia

金虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-20 20:05:54
lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-05-20 21:36:12
你用的是Fastdigest的内切酶,如果甲基化的方式是CpG: 完全重叠 – 阻止酶切。5微克的质粒用1微升有点少啊,应该用5微升才好啊
2楼2010-05-20 19:28:25
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韩丽丽

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 韩丽丽 at 2010-05-20 19:08:43:
用1微升十个单位的酶切5微克的质粒切了7小时了还切不全,真崩溃啊,大家也是这样吗?或者Fermentas的酶真的不如TAKARA的好用?

不会吧,用1微升已经是两倍的量了,用5微升?我从来没这样做过,为什么用这么多?
3楼2010-05-20 20:59:58
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韩丽丽

新虫 (小有名气)

不好意思,还想问下这个CPG完全重叠阻止酶切这个怎么理解?Nru1的识别序列就是TCGCGA呀,那这个酶就不能用?
4楼2010-05-20 21:06:30
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韩丽丽

新虫 (小有名气)

还有,就是想问一下,如果 我用5微升切多久就可以完全切开?
5楼2010-05-20 21:10:30
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gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
CPG是甲基化的一种形式,切多久,如果甲基化了,你切时间再长也不可能完全切开,如果实在切不开建议换一种感受态,重新提质粒进行酶切,
6楼2010-05-20 21:37:02
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韩丽丽

新虫 (小有名气)

可以切开,但是切不全
7楼2010-05-20 23:14:08
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