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【求助/交流】细胞培养
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新虫
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[交流]
【求助/交流】细胞培养
已有7人参与
大家好,我刚刚开始做细胞实验,用的是SW480细胞和MCF--7细胞,用DMEM培养液,师兄师姐以前养过,按他们的方法做,MCF--7细胞长得很好,可是SW480细胞复苏后细胞很快贴壁,传代后24小时,贴壁很少,慢慢地贴壁的那部分细胞也慢慢脱落,最后死光光。请各位指教,谢谢!
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1楼
2010-05-20 10:03:30
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green-apple
新虫
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专业: 胚胎工程
★ ★ ★ ★
小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):感谢交流~~· 2010-05-20 21:34:27
你的试验操作叙述的不清楚,先试试这几点:
1. 细胞复苏后PBS(-)清洗3次,最后一次培养基重悬(注意解冻温度与时间)。
2. 用一次性培养皿或瓶,培养前明胶或多聚赖氨酸铺层,增强细胞贴壁能力。
3. 培养条件不变的话看看血清是否保存得当。
4. 如果有消化过程,而且有EDTA时一定要清洗细胞。
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5楼
2010-05-20 21:23:30
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cheo163
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注册: 2009-10-16
性别:
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专业: 免疫生物学
★
小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
可以试试先用小瓶养,不行的话加大血清浓度,再不行的话换用质量更好的胎牛血清养,还不行的话就96孔饲养层培养,总之先长好再扩大。
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2楼
2010-05-20 16:38:59
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dhd997
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专业: 生物化工与食品化工
管辖:
分子生物
★
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-20 18:52:36
这个可能跟血清浓度有关,还有一个就是消化时间的问题。不同的细胞消化程度以及对胰酶的耐受程度也是不一样的。两种细胞不可以完全对待的。
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人生不过几十年,成败荣辱都在天,是非恩怨莫在意,健康快乐最值钱,自古人间苦无边,看得高远境如仙,愿你不为凡事恼,轻松快乐每一天。
3楼
2010-05-20 16:57:15
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jinkang309
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虫号: 958868
注册: 2010-03-01
性别: GG
专业: 细胞生物学研究中的新方法
★ ★ ★
小木虫(金币
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lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-20 18:52:21
讲一点不太成熟的想法:首先你说你师兄师姐已经做过,而且做的比较好;但你的细胞却逐渐死亡,我分析可能原因有以下:1.确保你的操作是否有问题,2.你的培养试剂和器皿洁净灭菌是否有问题,3.你的培养条件和环境是否有较明显的变化,希望别见笑!
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天道酬勤
4楼
2010-05-20 17:39:54
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