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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细胞培养
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bbaibb.love

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】细胞培养 已有7人参与

大家好，我刚刚开始做细胞实验，用的是SW480细胞和MCF--7细胞，用DMEM培养液，师兄师姐以前养过，按他们的方法做，MCF--7细胞长得很好，可是SW480细胞复苏后细胞很快贴壁，传代后24小时，贴壁很少，慢慢地贴壁的那部分细胞也慢慢脱落，最后死光光。请各位指教，谢谢！
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1楼 2010-05-20 10:03:30
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cheo163

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以试试先用小瓶养，不行的话加大血清浓度，再不行的话换用质量更好的胎牛血清养，还不行的话就96孔饲养层培养，总之先长好再扩大。
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2楼2010-05-20 16:38:59
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人，我型我秀！

优秀版主
★
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-20 18:52:36
这个可能跟血清浓度有关，还有一个就是消化时间的问题。不同的细胞消化程度以及对胰酶的耐受程度也是不一样的。两种细胞不可以完全对待的。
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
3楼2010-05-20 16:57:15
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jinkang309

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-20 18:52:21
讲一点不太成熟的想法:首先你说你师兄师姐已经做过，而且做的比较好；但你的细胞却逐渐死亡，我分析可能原因有以下：1.确保你的操作是否有问题，2.你的培养试剂和器皿洁净灭菌是否有问题，3.你的培养条件和环境是否有较明显的变化，希望别见笑！
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天道酬勤
4楼2010-05-20 17:39:54
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green-apple

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):感谢交流~~· 2010-05-20 21:34:27
你的试验操作叙述的不清楚，先试试这几点：
1. 细胞复苏后PBS(-)清洗3次，最后一次培养基重悬（注意解冻温度与时间）。
2. 用一次性培养皿或瓶，培养前明胶或多聚赖氨酸铺层，增强细胞贴壁能力。
3. 培养条件不变的话看看血清是否保存得当。
4. 如果有消化过程,而且有EDTA时一定要清洗细胞。
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5楼2010-05-20 21:23:30
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cavafory

铁虫 (小有名气)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-21 13:02:49
传代后贴得少，是不是你的培养基里面没有加谷氨酰胺，不利于贴壁，
另外，我没养过你这种细胞，是不是比较娇贵贴壁不牢那种，你消化的时间不要太久了，吹打的时候温柔一点，不要用力过猛。
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6楼2010-05-20 22:30:38
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):不错的主意~~ 2010-05-21 13:03:36
这个要多方面找原因的，你可以让你师姐师兄看你重头到尾操作一遍，再找原因，有可能是胰酶消化的环节出问题了。
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7楼2010-05-21 11:03:58
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bbaibb.love

新虫 (初入文坛)
多谢大家的指点！
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8楼2010-05-23 15:36:13
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