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【求助/交流】菌种用NTG法诱变的具体步骤及注意点已有2人参与
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dujing19841014
铁虫 (小有名气)
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- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2010-05-20 08:24:55
HarveyWang
捐助贵宾 (知名作家)
海外行者
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- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
applehappy(金币+10):基本上您说的我也知道，只是关于诱变所用的菌液浓度我不是很清楚，但还是很感谢 2010-06-27 20:48:16
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我原来做过。 重要的一点是： 尽量污染更少的东西；不去回收利用已经污染的器具。 污染过的东西，不要试图去解毒后清洗， 统统倒入一个铁皮桶内，加些报纸和酒精，找个安全的地方，烧完后倒掉。 1）菌液一般10ml/250ml摇瓶，事先培养至大约OD600=1.0 . 2）第一次做时，我还称量了一下NTG，（由于是本来就是含水的，不会很准的），以后就拿个比较长的竹签挑一小粒，直接放入菌液中。 3）摇床培养10 、20 、40、 60 min，取样100 uL 直接涂选择性平板（药物浓度一般设计的很高，是文献报道的十倍左右），能长出来的就挑来做验证了。 4）其实，诱导20min-30，就有大批的细胞死亡了，再加上后面的抗性，菌体长出来就不错啦。 这样，每次要扔掉的东西是： 一个摇瓶， 四只平板 四个玻璃棒涂布器。 几个枪头小东西。 总价钱也就是20块钱。 有机物统统烧黑碳化啦，不用回收利用。 |
2楼2010-05-20 04:20:39