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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】能不能pcr后产物直接酶切？
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michaelchen

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】能不能pcr后产物直接酶切？ 已有10人参与

请问各位有人做过pcr扩增后直接对产物进行酶切，不通过胶回收的吗？我的pcr产物量太少了，回收后都看不到了！
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1楼 2010-05-19 10:56:57
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匿名

用户注销 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1):同意 2010-05-19 11:10:35
本帖仅楼主可见
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2楼2010-05-19 11:10:13
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
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amisking(金币+1): 2010-05-19 12:31:11
如果条带单一，可以溶液回收后再切，pcr产物直接酶切效果不好
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3楼2010-05-19 11:23:12
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humants

金虫 (正式写手)
★ ★
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amisking(金币+1):good！ 2010-05-19 12:31:18
如果不打算做TA克隆，要注意引物设计的时候在5‘端多加几个辅助碱基，增加酶切效率，要不很难切开
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4楼2010-05-19 11:28:26
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霖希

★ ★
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amisking(金币+1):欢迎交流！ 2010-05-19 12:31:25
好像说Pcr的系统环境和酶切的不一样，所以应该都是纯化回收一下再切。量少可以一次多p一点。
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5楼2010-05-19 11:43:04
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012599

木虫 (小有名气)

guangliang

★
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应该都是纯化回收一下再切
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6楼2010-05-19 12:26:31
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Jarvis2010

木虫 (职业作家)
纯化回收一下再切
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7楼2010-05-19 12:31:27
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cheo163

金虫 (小有名气)
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lstt09nk(金币+1):同意~~ 2010-05-19 16:53:55
如果你的pcr体系是50ul，一般就可以直接把溶液纯化后酶切，不用割胶~~
25ul体系就太少了，没什么东西。
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8楼2010-05-19 13:18:21
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miya173

银虫 (小有名气)
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lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-19 16:54:18
buffer不一样，可能会有影响。
如果你的pcr产物很特异，就直接做个pcr产物回收，不用做胶回收。
如果不特异，就多扩增几管，一起做胶回收，用少量的溶液洗脱。
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9楼2010-05-19 14:23:33
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银杏下

金虫 (小有名气)
★
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我觉得你可以把关注点放在如何提高PCR产量，因为正常情况下PCR结果都会比较好。当然你也可以不用切胶直接清洗回收试下。
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10楼2010-05-19 15:37:20
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