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michaelchen

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】能不能pcr后产物直接酶切?已有10人参与

请问各位有人做过pcr扩增后直接对产物进行酶切,不通过胶回收的吗?我的pcr产物量太少了,回收后都看不到了!
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匿名

用户注销 (小有名气)

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1949stone(金币+1):同意 2010-05-19 11:10:35
本帖仅楼主可见
2楼2010-05-19 11:10:13
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jasco

木虫 (正式写手)

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amisking(金币+1): 2010-05-19 12:31:11
如果条带单一,可以溶液回收后再切,pcr产物直接酶切效果不好
3楼2010-05-19 11:23:12
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humants

金虫 (正式写手)

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amisking(金币+1):good! 2010-05-19 12:31:18
如果不打算做TA克隆,要注意引物设计的时候在5‘端多加几个辅助碱基,增加酶切效率,要不很难切开
4楼2010-05-19 11:28:26
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霖希

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amisking(金币+1):欢迎交流! 2010-05-19 12:31:25
好像说Pcr的系统环境和酶切的不一样,所以应该都是纯化回收一下再切。量少可以一次多p一点。
5楼2010-05-19 11:43:04
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012599

木虫 (小有名气)

guangliang


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应该都是纯化回收一下再切
6楼2010-05-19 12:26:31
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Jarvis2010

木虫 (职业作家)

纯化回收一下再切
7楼2010-05-19 12:31:27
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cheo163

金虫 (小有名气)

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lstt09nk(金币+1):同意~~ 2010-05-19 16:53:55
如果你的pcr体系是50ul,一般就可以直接把溶液纯化后酶切,不用割胶~~
25ul体系就太少了,没什么东西。
8楼2010-05-19 13:18:21
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miya173

银虫 (小有名气)

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lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-19 16:54:18
buffer不一样,可能会有影响。
如果你的pcr产物很特异,就直接做个pcr产物回收,不用做胶回收。
如果不特异,就多扩增几管,一起做胶回收,用少量的溶液洗脱。
9楼2010-05-19 14:23:33
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银杏下

金虫 (小有名气)


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我觉得你可以把关注点放在如何提高PCR产量,因为正常情况下PCR结果都会比较好。当然你也可以不用切胶直接清洗回收试下。
10楼2010-05-19 15:37:20
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