24小时热门版块排行榜    

查看: 1493  |  回复: 32
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

陈思容

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】有用pfu的吗,求教 已有15人参与

这个学期开学来就一直在用高保真酶PCR,先用Taq做TD-PCR(65-50),35cycle,出来的条带很亮,可是用pfu在同样的反应条件下(延伸时间由1min改为2min),却出不来条带,要么是前段的引物二聚体,要么是弥散带,反正就是不出来我要的带,实验进展因此耽搁了好多,望各位高手赐教,附图。


回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biogefart

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1):good! 2010-05-12 08:15:44
pfu 的效率比taq低很多,我看你的产物也不是很长,taq的突变率不至于产生突变,还是用tag吧,
闹太套
3楼2010-05-10 15:20:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答

霖希


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我以前在学校也遇到过类似的情况,是不是可以稍微改变一下退火温度?
2楼2010-05-10 14:18:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

miya173

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
仔细看看pfu的说明书啊,pfu的体系连加样顺序都跟其它的没不一样,taq一分钟可以扩2K,pfu是推荐按一分钟扩500bp计算。自己仔细看看吧。
4楼2010-05-10 15:32:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
正常,保真性高了效率会低的,可以尝试用taq plus,保真性也不错
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-05-10 15:32:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见