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biozhangliang

木虫 (小有名气)

土博士

[交流] 【求助/交流】散金币,请问荧光标记酶方面的东,谢谢! 已有2人参与

本人要做个试验,看酶对植物的作用。
例如,纤维素酶对甘薯的作用。想得到电镜照片。
思路是,首先把纤维素酶用荧光标记,然后再用这个酶去作用甘薯,看酶是怎么逐渐作用的,最后在用荧光显微镜照片。

我想知道,怎么对我现在手上的酶做荧光标记,是有商品试剂盒还是什么?
标记好的酶,还是像以前一样,直接用酒可以了吗?
标记过的酶性质上有没有什么变化,是否需要做一定的试验去考察标记前后的酶变化,需要做什么试验?

谢谢!!!
有用的答案都会散金币的,谢谢!
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做好工作,做好人!
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lzhwin

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):感谢回帖交流~~ 2010-05-07 19:02:02
biozhangliang(金币+3):谢谢! 2010-05-10 09:16:08
1、荧光染料与蛋白质连接这样的技术一般很少看到有实验室会做。见的比较多的都是一些商品化的抗体酶。比如连有HRP的二抗,连有fitc的二抗之类的。一定要做就查查文献吧,怎么都觉得跟化学合成一样。

2、不知道你说的电镜是不是电子显微镜的简称,如果是的话你要明白电镜是不能采集荧光信号的。采集荧光请使用荧光或者共聚焦显微镜

3、个人觉得你应该跟你的导师讨论一下实验的细节,个人觉得有些地方不太合理。“对甘薯的影响”这种话太笼统了,最后有方向比如生理指标、生化指标、或者显微结构之类的

4、就算你可以用荧光去标记酶然后预期能看到什么呢?目镜下大片的荧光是你的酶,而你的甘薯并不会有什么特异的结构发出荧光,你怎么得出结论呢?
3楼2010-05-07 16:49:51
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biozhangliang

木虫 (小有名气)

土博士

没人回答我吗?呵呵,顶一下!
做好工作,做好人!
2楼2010-05-07 15:16:41
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biozhangliang

木虫 (小有名气)

土博士

1、荧光染料与蛋白质连接这样的技术一般很少看到有实验室会做。见的比较多的都是一些商品化的抗体酶。比如连有HRP的二抗,连有fitc的二抗之类的。一定要做就查查文献吧,怎么都觉得跟化学合成一样。

这个我也不知道了

2、不知道你说的电镜是不是电子显微镜的简称,如果是的话你要明白电镜是不能采集荧光信号的。采集荧光请使用荧光或者共聚焦显微镜

是用的荧光显微镜

3、个人觉得你应该跟你的导师讨论一下实验的细节,个人觉得有些地方不太合理。“对甘薯的影响”这种话太笼统了,最后有方向比如生理指标、生化指标、或者显微结构之类的

我主要想想看酶是怎么作用于甘薯细胞壁的,主要作用于细胞壁的那一部分(如,果胶,木质素等)。也就是您所说的显微结构。

4、就算你可以用荧光去标记酶然后预期能看到什么呢?目镜下大片的荧光是你的酶,而你的甘薯并不会有什么特异的结构发出荧光,你怎么得出结论呢?

我现在也不知道甘薯会不会自发荧光,所以想试试。应为我看见别人文献上面,酶和其它底物(如,竹子)接触部分的图片很好,我也想看看
做好工作,做好人!
4楼2010-05-10 09:30:30
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