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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】散金币，请问荧光标记酶方面的东，谢谢！
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biozhangliang

木虫 (小有名气)

土博士

[交流] 【求助/交流】散金币，请问荧光标记酶方面的东，谢谢！ 已有2人参与

本人要做个试验，看酶对植物的作用。
例如，纤维素酶对甘薯的作用。想得到电镜照片。
思路是，首先把纤维素酶用荧光标记，然后再用这个酶去作用甘薯，看酶是怎么逐渐作用的，最后在用荧光显微镜照片。

我想知道，怎么对我现在手上的酶做荧光标记，是有商品试剂盒还是什么？
标记好的酶，还是像以前一样，直接用酒可以了吗？
标记过的酶性质上有没有什么变化，是否需要做一定的试验去考察标记前后的酶变化，需要做什么试验？

谢谢！！！
有用的答案都会散金币的，谢谢！
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做好工作，做好人！
1楼 2010-05-06 16:36:40
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biozhangliang

木虫 (小有名气)

土博士
没人回答我吗？呵呵，顶一下！
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做好工作，做好人！
2楼2010-05-07 15:16:41
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):感谢回帖交流~~ 2010-05-07 19:02:02
biozhangliang(金币+3):谢谢！ 2010-05-10 09:16:08
1、荧光染料与蛋白质连接这样的技术一般很少看到有实验室会做。见的比较多的都是一些商品化的抗体酶。比如连有HRP的二抗，连有fitc的二抗之类的。一定要做就查查文献吧，怎么都觉得跟化学合成一样。

2、不知道你说的电镜是不是电子显微镜的简称，如果是的话你要明白电镜是不能采集荧光信号的。采集荧光请使用荧光或者共聚焦显微镜

3、个人觉得你应该跟你的导师讨论一下实验的细节，个人觉得有些地方不太合理。“对甘薯的影响”这种话太笼统了，最后有方向比如生理指标、生化指标、或者显微结构之类的

4、就算你可以用荧光去标记酶然后预期能看到什么呢？目镜下大片的荧光是你的酶，而你的甘薯并不会有什么特异的结构发出荧光，你怎么得出结论呢？
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3楼2010-05-07 16:49:51
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biozhangliang

木虫 (小有名气)

土博士
1、荧光染料与蛋白质连接这样的技术一般很少看到有实验室会做。见的比较多的都是一些商品化的抗体酶。比如连有HRP的二抗，连有fitc的二抗之类的。一定要做就查查文献吧，怎么都觉得跟化学合成一样。

这个我也不知道了

2、不知道你说的电镜是不是电子显微镜的简称，如果是的话你要明白电镜是不能采集荧光信号的。采集荧光请使用荧光或者共聚焦显微镜

是用的荧光显微镜

3、个人觉得你应该跟你的导师讨论一下实验的细节，个人觉得有些地方不太合理。“对甘薯的影响”这种话太笼统了，最后有方向比如生理指标、生化指标、或者显微结构之类的

我主要想想看酶是怎么作用于甘薯细胞壁的，主要作用于细胞壁的那一部分（如，果胶，木质素等）。也就是您所说的显微结构。

4、就算你可以用荧光去标记酶然后预期能看到什么呢？目镜下大片的荧光是你的酶，而你的甘薯并不会有什么特异的结构发出荧光，你怎么得出结论呢？

我现在也不知道甘薯会不会自发荧光，所以想试试。应为我看见别人文献上面，酶和其它底物（如，竹子）接触部分的图片很好，我也想看看
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做好工作，做好人！
4楼2010-05-10 09:30:30
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