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[交流] 【求助/交流】蛋白诱导问题咨询已有10人参与

大家好，最近做蛋白诱导遇到一些问题，Western blot 检测有目的蛋白表达，但SDS-PAGE检测则看不到明显的目的条带，已经多次优化条件，但没有效果，希望大家多多帮忙，谢谢！

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1楼 2010-05-05 20:19:32

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runying36

银虫 (正式写手)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

10楼: Originally posted by snoopyzxx at 2010-05-06 11:25:05
膜蛋白用一般的诱导条件可能很难诱导出来，你可以读下上面那篇文献和以下文献：
Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures
T7表达系统及自诱导蛋白产出策略

我用该系统做过不少 ...

我试了一下，做了一个蛋白在两种载体上的表达，用aotuinduction的方法对可溶性诱导似乎没有什么助益。或者说这种方法想要得到可溶性表达的几率和IPTG的诱导方法不相上下。
不过还是要谢谢snoopyzxx给我的帮助

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12楼2013-06-27 15:47:00

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todouhy

铜虫 (小有名气)

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plantaqp(金币+1):谢谢交流 2010-05-06 03:22:18

会不会是形成了包涵体的啊？

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2楼2010-05-05 21:32:53

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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
plantaqp(金币+1): 2010-05-06 03:22:41

引用回帖:

Originally posted by zhy19850501 at 2010-05-05 20:19:32:
大家好，最近做蛋白诱导遇到一些问题，Western blot 检测有目的蛋白表达，但SDS-PAGE检测则看不到明显的目的条带，已经多次优化条件，但没有效果，希望大家多多帮忙，谢谢！

我也遇到这个问题，换了3种表达载体和2种不同的表达菌株，试过17，25，30，37度条件，加的IPTG终浓度包括有0.1，0.4和1mM。但是都没有很明显的目的条带。只是没有做western来检测。现在也在苦恼怎么在大肠中表达植物基因了。

希望能一起交流！

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3楼2010-05-05 21:41:21

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