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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 【求助】反相色谱柱峰形改变
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houhoujiayou

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】反相色谱柱峰形改变 已有6人参与

大家好，我是名刚接触液相色谱的新手，我有两种物质需要摸索液相条件使之分开，其中一种是短肽，另一种和它结构很相似，查文献看短肽和蛋白类的一般都用反相色谱，最近借别人的C18柱做了一次液相，用甲醇溶液为流动相，但是跑液相时就有问题，第一种物质出了一个峰，接着跑第二种物质，出了两个峰，这是纯的物质啊，怎么会出现这种情况，而且人家再用这根柱子时，进的是标样，可是出的峰都是梯形的，峰形改变了，是怎么回事啊
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1楼 2010-05-05 16:35:59
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yuliang6378

木虫 (正式写手)
★
houhoujiayou(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by houhoujiayou at 2010-05-05 16:35:59:
大家好，我是名刚接触液相色谱的新手，我有两种物质需要摸索液相条件使之分开，其中一种是短肽，另一种和它结构很相似，查文献看短肽和蛋白类的一般都用反相色谱，最近借别人的C18柱做了一次液相，用甲醇溶液为流 ...

出现梯形是因为进样量过大所致，减少进样量即可。。。
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9楼2010-05-10 08:40:19
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xxcl1999

木虫 (正式写手)
★
pplover(金币+1):感谢参与！ 2010-05-05 18:23:08
houhoujiayou(金币+1):能不能说清楚点，比如怎么选择缓冲溶液，另外那个柱子现在跑的标样都呈梯形了，是怎么回事啊？能恢复吗？ 2010-05-05 19:48:08
应该用缓冲溶液吧。
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2楼2010-05-05 18:09:26
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xxcl1999

木虫 (正式写手)
★
waiy2001(金币+1):谢谢交流 2010-05-05 23:40:33
houhoujiayou(金币+2):谢谢啊，我后来用乙腈和水做流动相试了一下，不知道为什么给的样品跑出的是四个峰，但是老师给我时说那个样品（只有一种物质）是98%的纯度，应该可以做标样了都，可是现在我都不敢说是老师给的东西不纯还是我色谱条件还是没找对，这四个峰都是连着的，而且其中两个峰还差不多大小，不知道会不会是什么手型物质或是我的样品配置时分解了之类的，汗，因为对液相很不懂，我也不知道自己说的能不能给你提供点信息帮我分析一下了，我后来加入三氟乙酸试了一下，出的峰形状很差，都不是标准的峰形了，不知道错在哪了，汗死 2010-05-09 21:30:17
在流动相中加点酸或碱试试，比如三氟乙酸，醋酸，三乙胺等，就是所谓的扫尾剂，这个要看被分析样品的性质，pKa, 等电点等。另外，流动相的比例也要调整，可以梯度试试。
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3楼2010-05-05 21:12:22
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xkp123

木虫 (著名写手)
★
waiy2001(金币+1):谢谢交流 2010-05-05 23:40:53
houhoujiayou(金币+1):恩，谢谢啊，那就用纯的甲醇冲就可以了吧，是不是流速要低点？ 2010-05-09 21:32:10
对，流动相先要换，至于梯形，估计是有残余的东西在柱子上了，导致柱效下降，所以柱子的好好冲冲，问题应该不大
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4楼2010-05-05 21:41:54
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