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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大量金币感谢，基因克隆表达。
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
★ ★ ★
zhmy26(金币+4): 2010-05-11 15:19:36
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-12 23:26:12
1、原核表达的话，注意包涵体问题。那没活性。

2、真核表达，注意表达标签等共表达，导致多余，后期的切除也是麻烦。

3、你做的这个原核表达，若插入两个基因，可以用linker将其连接，有独立的，有分开的。一般是让两个基因处于不同的控制子之下。

4、共表达系统的质粒，转入基因时候，多考虑其表达蛋白的可溶性和表达丰度的一致性。

5、带有启动序列的质粒，可以直接用。自己添加强终止子也可以。
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11楼2010-05-11 09:22:42
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zhmy26

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhwenxing at 2010-05-11 09:22:42:
1、原核表达的话，注意包涵体问题。那没活性。

2、真核表达，注意表达标签等共表达，导致多余，后期的切除也是麻烦。

3、你做的这个原核表达，若插入两个基因，可以用linker将其连接，有独立的，有分开的。 ...

您所说的linker大概意思我懂，是一种专用的序列吗？
另外，如何才能够注意表达的可溶性和丰度呢？

不好意思，实在是水平太差。这些天看书看的头大。快要进实验室了，却机会一无所知。

[ Last edited by zhmy26 on 2010-5-11 at 15:21 ]
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12楼2010-05-11 15:20:28
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
zhmy26(金币+4): 2010-05-12 22:14:33
引用回帖:
Originally posted by zhmy26 at 2010-05-11 15:20:28:

您所说的linker大概意思我懂，是一种专用的序列吗？
另外，如何才能够注意表达的可溶性和丰度呢？

不好意思，实在是水平太差。这些天看书看的头大。快要进实验室了，却机会一无所知。

[ Last edited by ...

linker序列的设计比较灵活，上网一查就知道了。此外Takara的目录上有一部分linker的序列和介绍，参考一下。

处于不同启动子控制下的表达丰度有差异。蛋白的积累量也影响其表达。这个影响因素太多了。得摸索条件吧。  串联基因，我搞了几次，部分over。
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13楼2010-05-12 19:03:24
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zhangjiewtt

金虫 (小有名气)
zhmy26(金币+1): 2010-05-13 09:39:37
同意一楼、五楼的观点
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14楼2010-05-12 22:32:45
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pidou213

木虫 (正式写手)
zhmy26(金币+1): 2010-05-13 09:39:42
看客学习者！一起学习
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见得多爱的多
15楼2010-05-12 23:17:39
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